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红松松塔多糖分离纯化及生物活性研究

作　者: 蒙琦
导　师: 杨鑫
学　校: 哈尔滨工业大学
专　业: 生物化工
关键词: 红松松塔 多糖 提取 纯化 生物活性
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 86次
引　用: 1次
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内容摘要


红松（Pinus koraiensis）系松科（pinaceae）松属（Pinus）植物，是我国东北部地区重要的松属树种T。T本文从红松松塔多糖的提取及纯化入手，在研究松塔多糖理化性质和单糖组成的基础上，探讨了松塔多糖的生物活性。采用热水浸提法对松塔多糖进行提取，在单因素的基础上采用三因素三水平的正交实验对提取工艺进行优化，确定了最佳的工艺参数，即浸提温度100℃、料液比1:12、浸提时间4 h，多糖提取率达到最高，为15.2 mg·gP-1P。同时利用固相微萃取结合气相色谱-质谱联用技术分析了红松松塔挥发性成分，鉴定出66种组分，主要为单萜和倍半萜类成分。系统研究了松塔粗多糖的脱蛋白和脱色工艺，采用酶法和三氯乙酸法进行松塔多糖脱蛋白工艺的研究；采用过氧化氢法和活性炭进行松塔多糖脱色工艺的研究。在脱蛋白试验中，酶法脱蛋白的最佳工艺参数：pH值4.5，酶添加量0.10%，酶解温度60℃及酶解时间2.0 h，蛋白脱除率达83.42%；三氯乙酸法脱蛋白的最佳工艺参数：样液:三氯乙酸为1:3、震荡时间20 min、三氯乙酸浓度6%，蛋白脱除率达72.41%。在脱色试验中，过氧化氢法脱色的最佳工艺参数：过氧化氢浓度6%、时间60 min、温度80℃、pH值11，脱色率为95.50%；活性碳法脱色的最佳工艺参数：活性炭添加量1.5%、时间60 min、温度50℃、pH值3，脱色率达74.52%。根据上述实验结果，本研究最终采用三氯乙酸法对多糖进行脱蛋白，过氧化氢法对多糖进行脱色。测定了纯化后的松塔多糖的理化性质，并利用凝胶色谱对多糖的纯度进行测定。通过薄层色谱法和气相色谱-质谱联用法确定松塔多糖的单糖组成，结果表明松塔多糖由L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖组成，其摩尔比为1.34: 1.73: 0.39: 2.59: 3.61: 8.66。最后，分别对松塔多糖进行了抑菌和抗氧化活性的研究。在抑菌实验中，松塔多糖对大肠杆菌、沙门氏菌及志贺氏菌均有一定的抑制作用，多糖浓度与对大肠杆菌和沙门氏菌的抑制作用存在明显的量效关系；在抗氧化活性研究中，松塔多糖对ABTS自由基具有一定的清除能力，ICB50B约为28 mg·mLP-1P，松塔多糖对Fe2+具有一定的鳌合能力，ICB50B约为78 mg·mL-1。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-10
第1章 绪论  10-23
  1.1 立题背景  10-11
  1.2 红松的研究概述  11-14
    1.2.1 红松植物简介  11-12
    1.2.2 红松化学成分研究进展  12-13
    1.2.3 红松生物活性研究进展  13-14
  1.3 多糖的研究进展  14-21
    1.3.1 多糖的来源  15
    1.3.2 多糖的提取  15-17
    1.3.3 多糖的纯化  17-18
    1.3.4 多糖的结构分析  18-19
    1.3.5 多糖的生物活性  19-21
  1.4 本课题主要研究内容  21-23
第2章 材料和方法  23-37
  2.1 材料及仪器  23-25
    2.1.1 材料与试剂  23-24
    2.1.2 仪器  24-25
  2.2 实验方法  25-37
    2.2.1 红松松塔多糖研究的技术路线  25-26
    2.2.2 多糖含量的测定  26
    2.2.3 蛋白质含量的测定  26-27
    2.2.4 松塔挥发性成分分析  27-28
    2.2.5 松塔多糖的提取  28-29
    2.2.6 松塔多糖的脱蛋白  29-31
    2.2.7 松塔多糖的脱色  31-33
    2.2.8 松塔多糖的单糖组成分析  33-35
    2.2.9 松塔多糖对常规致病菌抑制作用的测定  35-36
    2.2.10 松塔多糖的抗氧化活性测定  36-37
第3章 红松松塔多糖的提取  37-47
  3.1 松塔挥发性成分的分析  37-42
    3.1.1 固相微萃取纤维萃取化合物种类与数量  37-41
    3.1.2 固相微萃取纤维头的灵敏度分析  41-42
  3.2 多糖测定标准曲线的绘制  42-43
  3.3 松塔多糖提取工艺优化  43-46
    3.3.1 松塔多糖提取的单因素实验  43-45
    3.3.2 松塔多糖提取的正交实验  45-46
  3.4 本章小结  46-47
第4章 红松松塔多糖的纯化  47-66
  4.1 蛋白质测定标准曲线的绘制  47-48
  4.2 松塔多糖的脱蛋白  48-56
    4.2.1 酶法脱蛋白  48-52
    4.2.2 化学法脱蛋白  52-55
    4.2.3 脱蛋白效果的比较  55-56
  4.3 松塔多糖的脱色  56-65
    4.3.1 脱色率测定波长的确定  56-57
    4.3.2 过氧化氢法脱色  57-60
    4.3.3 活性碳法脱色  60-64
    4.3.4 脱色效果的比较  64-65
  4.4 本章小结  65-66
第5章 红松松塔多糖的单糖组成及生物活性研究  66-76
  5.1 松塔多糖的理化性质  66-67
  5.2 松塔多糖的纯度测定  67
  5.3 松塔多糖的单糖组成分析  67-72
    5.3.1 TLC法测定松塔多糖的单糖组成  67-69
    5.3.2 GC-MS法分析松塔多糖的单糖组成  69-72
  5.4 松塔多糖的生物活性研究  72-75
    5.4.1 松塔多糖对常规致病菌的抑制作用  72-74
    5.4.2 松塔多糖抗氧化活性的研究  74-75
  5.5 本章小结  75-76
结论  76-78
参考文献  78-84
缩略词表  84-85
攻读学位期间发表的学术论文  85-87
致谢  87

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 化学分析与鉴定
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