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大黄素对结肠Cajal间质细胞毒—效相关性的研究

作　者: 王嫣虹
导　师: 彭成
学　校: 成都中医药大学
专　业: 药理学
关键词: 大黄素 毒-效相关性 结肠Cajal间质细胞
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的：研究大黄素对结肠Cajal间质细胞的毒-效相关性。方法：本实验采用均匀设计和MTT法研究大黄素不同浓度和不同时间点对结肠Cajal间质细胞(以下简称ICC)的影响,从而确定大黄素对ICC的最大、最小药效浓度及最大、最小毒性浓度。用光学显微镜观察药效及毒性浓度大黄素对ICC形态学的影响。用细胞酶学方法、比浊比色法等观察大黄素在药效、毒性浓度时对ICC细胞膜稳定性、内环境的影响,从而验证大黄素对ICC的毒效作用并初步探讨其机制。结果：大黄素对ICC的最大毒性浓度是1%,最小毒性浓度是0.001%,最大药效浓度是0.1×10-3%,最小药效浓度是0.8×10-5%。在药效浓度范围内能使ICC增殖明显,毒性浓度范围使细胞数量显著减少。在药效浓度范围内大黄素对ICC细胞形态无明显影响,并能使其网状结构致密;在毒性浓度范围内,随着浓度的增大和作用时间的延长,细胞间突起断裂,胞浆中见空泡出现,个别细胞器呈颗粒状,折光性消失,胞体开始崩解。药效浓度和毒性浓度分别作用0.5min、15min、30min、60min、180min及360min,毒性浓度作用后细胞介质中MDA和细胞中ACP活力显著增高。三个药效浓度梯度作用以上时间后细胞内Ca2+含量减少,至最大药效浓度作用6h后开始回升,当浓度上升为0.001%(最小毒性浓度)时Ca2+含量显著增加,并随着毒性浓度增大而持续显著升高。K+在三个药效浓度作用0.5min后略有减少,后持续上升,作用至毒性浓度则显著降低；Na+变化时程和K+相同,变化趋势相反：药效浓度作用0.5min后略有升高,随后缓慢下降,作用至毒性浓度后又显著回升。Na+-K+-ATP酶活性在药效浓度下增大,作用至15min后增大有统计学意义,而在毒性浓度下显著降低。Ca2+-ATP酶变化趋势和Na+-K+-ATP酶大致相似,只是在最大药效浓度作用60min后其活性就开始降低,至毒性浓度时急剧下降。结论：大黄素对ICC具有药效、毒性双重作用。药效浓度下对细胞形态无明显影响,并能促进其增殖,这在临床上意义重大。并能通过降低胞质内的Ca2+来影响ICC产生起搏电流,促进肠道慢波。通过升高Ca2+浓度来加强细胞间信号传导。毒性浓度下使细胞发生严重损伤,机制可能为抑制Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶活性,导致细胞内Na+、Ca2+浓度急剧升高,K+浓度降低。并增加第二信使IP3和cAMP活性使Ca2+进一步升高,导致细胞形态和功能的损伤。大黄素对ICC的毒效作用和其浓度呈正相关,和作用时间也关系密切。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-9
英文缩略词表  9-10
引言  10-12
实验研究  12-37
  1 实验材料  12-14
    1.1 受试药物  12
    1.2 实验动物  12
    1.3 实验试剂  12-13
      1.3.1 主要实验试剂  12
      1.3.2 主要试剂配制  12-13
    1.4 实验仪器  13-14
    1.5 统计方法  14
  2 实验方法  14-20
    2.1 结肠Cajal间质细胞原代获取和体外培养方法  14-15
    2.2 结肠Cajal间质细胞不同培养时间形态变化  15
    2.3 结肠Cajal间质细胞原代培养生长对数期的确定  15
    2.4 结肠Cajal间质细胞免疫荧光鉴定  15
    2.5 大黄素对结肠Cajal间质细胞毒性浓度、药效浓度的确定  15-16
    2.6 大黄素毒效浓度对ICC形态学的影响  16
    2.7 大黄素对结肠Cajal间质细胞生物膜膜稳定性的影响  16-18
      2.7.1 对细胞介质中丙二醛(MDA)的影响  16-17
      2.7.2 对细胞内酸性磷酸酶(ACP)的影响  17-18
    2.8 大黄素对ICC内环境的影响  18-20
      2.8.1 大黄素对ICC内电解质含量的影响  18-19
      2.8.2 大黄素对ICC内Na~+-K~+-ATP酶及Ca~(2+)-ATP酶的影响  19-20
  3 实验结果  20-37
    3.1 ICC不同培养时间形态变化  20-21
    3.2 KM乳鼠ICC生长曲线的测定  21-22
    3.3 KM乳鼠ICC免疫荧光鉴定  22
    3.4 大黄素对ICC最大、最小毒性浓度的测定  22-23
    3.5 大黄素对ICC最大、最小药效浓度的测定  23-24
    3.6 大黄素毒效浓度对ICC形态的影响  24-27
      3.6.1 大黄素毒性浓度对ICC形态的影响  24-26
      3.6.2 大黄素药效浓度对ICC形态的影响  26-27
    3.7 大黄素对ICC生物膜膜稳定性的影响  27
      3.7.1 对细胞介质中丙二醛(MDA)的影响  27
      3.7.2 对细胞内酸性磷酸酶(ACP)的影响  27
    3.8 大黄素对ICC内环境的影响  27-37
      3.8.1 对细胞内电解质的影响  27-28
      3.8.2 对细胞内Na~+-K~+-ATP酶及Ca~(2+)-ATP酶的影响  28-37
讨论  37-52
  1 毒-效相关性  37-41
    1.1 对"毒"的认识  37
    1.2 对"效"的认识  37-38
    1.3 对毒-效相关性的认识  38-39
    1.4 对大黄及大黄素毒-效相关性的认识  39-41
  2 方法学建立  41-43
    2.1 关于结肠Cajal间质细胞  41-42
    2.2 关于均匀设计  42-43
  3 大黄素对ICC的毒-效相关性  43-52
    3.1 对ICC形态及数量的影响  43-44
    3.2 对ICC细胞膜稳定性的影响  44-47
    3.3 对ICC细胞内环境的影响  47-52
结论  52-53
问题与展望  53-54
致谢  54-55
参考文献  55-60
附件Ⅰ 综述  60-68
  参考文献  65-68
附件Ⅱ 综述  68-76
  参考文献  73-76
附件Ⅲ 在读期间参加的课题、参编的书籍和发表的文章  76-77

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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