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中国主要茸鹿分子鉴别及分子系统学的研究

作　者: 张敏
导　师: 白秀娟
学　校: 东北农业大学
专　业: 动物遗传与育种
关键词: 茸鹿 分子标记鉴定 分子系统学
分类号: S825
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 266次
引　用: 2次
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内容摘要


鹿与人类生活自古以来就有密切关系。鹿浑身是宝，给人们提供了极为丰富的产品，其中最贵重的产品是鹿茸，是传统名贵的中药材，能治疗多种疾病，上百种中成药皆有鹿茸配伍。我国是世界上养鹿最早的国家，也是驯养茸鹿历史最悠久的国家，其中我国驯养梅花鹿已有300多年的历史，我国在2000年版《中华人民共和国药典》只规定了梅花鹿鹿茸、马鹿鹿茸为正品药材。由于鹿茸及产品资源锐减而需求量激增，使得伪品、混淆品和代用品不断涌现。从国内市场来看存在着严重的以假充真以次充好的问题，很大程度上制约了中医药的安全有效及其向现代化、标准化和国际化的发展，其品种鉴定与质量评价工作越来越棘手其鉴定具有重要的现实意义。传统生药鉴定主要包括基源鉴定、性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定、生物鉴定等。至今仍是生药学研究的重要内容和手段。 在本研究中采用分子生物学的鉴定的方法，对四种茸鹿的SRY基因进行扩增，从扩增的图象可以看到我们采用的引物准确的对这四种鹿茸进行区别。在相同条件下用这种引物扩增这四种鹿都可以扩增出明显的条带且条带数目存在差异。而且阴性对照没有出现任何条带证明结果真实可靠!这样我们计划用引物2，TAQ酶，dNTP,PCR反应缓冲液 组成这四种药材鹿茸鉴定的试剂盒 用以上扩增的图象做为标准，可以有效的检出鹿茸的种类，因为目前还没有对鹿的种内群体的差异和分歧进行的报道，该试剂盒的开发，可以有效制止同源性假冒药材的泛滥，维护人们的经济效益，随着该技术再实践中的不断应用和日臻完美，可以建立名贵同类鹿茸药材检测技术。 在脊椎动物的分子系统需的研究中，随着mtDNA序列的大量积累，人们越来越迫切的想得到核DNA的信息，来对mtDNA的资料进行补充，以便在系统学研究中对所言及的对象有一个更为全面准确地认识。由于rDNA的碱基顺序可作为研究生物系统进化和分类的可靠参照物，本研究通过18SrDNA片断来探讨鹿科动物的遗传分化关系，分子系统学进化关系。 在实验中对中国四种茸鹿的核糖体的18SrDNA进行了克隆和测序，发送到GeneBank上(序列号分别是：AY225108 AY223903 AY145527)对其物种间同源性进行比较研究，并采用DNASTAR软件包中的MegAlign软件按Clustal排序，用Mega 2.1软件的UPGMA法建树。采用UPGMA法，Bootstrap检验，其结果和Mega 2.1软件的NJ法构建进化树是一致的。得出马鹿则最后从梅花鹿中分化出来．他们的同源性最高。与Wang& Du(1982)等研究结果一致。

全文目录


摘要  8-9
英文摘要  9-11
1 前言  11-23
  1.1 鹿及其药用价值  11-14
  1.2 中国主要茸鹿的概述  14-15
    1.2.1 梅花鹿  14
    1.2.2 马鹿  14-15
    1.2.3 驯鹿  15
  1.3 鹿产品鉴别方法  15-18
    1.3.1 基源鉴定  15
    1.3.2 形状鉴定  15-16
    1.3.3 显微鉴定  16
    1.3.4 理化鉴定  16
    1.3.5 生物鉴定  16-17
    1.3.6 分子生物学鉴定  17-18
  1.4 分子系统学  18-21
    1.4.1 分子系统学的概述  18-19
    1.4.2 分子标记或遗传标记(genetic maker)  19-20
    1.4.3 核糖体rRNA基因在分子系统学中的研究  20-21
  1.5 本研究的目的和意义  21-23
2 实验材料和方法  23-32
  2.1 实验材料  23
  2.2 主要试剂和药品的配制  23-25
  2.3 主要仪器设备  25
  2.4 实验方法  25-32
3 结果  32-44
  3.1 鹿茸基因组DNA的图象  32-33
  3.2 中国主要茸鹿分子标记鉴定的结果  33-35
  3.3 中国主要茸鹿的分子系统学的扩增结果  35-44
    3.3.1 四种鹿18SrDNA基因的扩增结果  35-36
    3.3.2 克隆质粒酶切的结果  36-37
    3.3.3 DNA序列分析  37-42
    3.3.4 四种鹿的18SrRNA基因进化树状图  42-44
4 讨论  44-47
  4.1 中国主要茸鹿分子生物学鉴定的讨论  44-45
    4.1.1PCR反应的适宜条件  44
    4.1.2 性别基因  44-45
  4.2 中国主要茸鹿分子系统学研究的讨论  45-47
5 结论  47-48
  5.1 中国主要茸鹿分子生物学鉴定的结论  47
  5.2 中国主要茸鹿分子系统学研究的结论  47-48
参考文献  48-52
附录  52-53
攻读硕士期间所发表的论文  53-54
致谢  54

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 鹿
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