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活性氧参与百草枯诱导的HL-60细胞毒及抗氧化剂的保护作用
作 者: 杨洋
导 师: 王勤
学 校: 兰州大学
专 业: 生物物理学
关键词: 百草枯 HL-60细胞 活性氧 过氧化氢 超氧阴离子 抗氧化剂 抗氧化酶
分类号: R733.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2007年
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内容摘要
为了在细胞水平研究活性氧在百草枯(paraquat, PQ)毒性中的作用,本研究选用人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞株,建立了HL-60细胞PQ损伤模型。通过测定PQ作用HL-60细胞后对细胞增殖的抑制;细胞丙二醛(malondialedhyde, MDA)含量与总抗氧化能力(total antioxidation capability, T-AOC)的变化;细胞中超氧阴离子(O2·-)与过氧化氢(H2O2)含量变化,分析了PQ对HL-60细胞的毒性作用,并初步探讨谷胱甘肽(glutathione, GSH)、N-乙酰-L-半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine, NAC)、超氧化物岐化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)对PQ诱导HL-60细胞中毒的保护。主要研究内容和结果如下:1.百草枯诱导产生活性氧致HL-60细胞中毒不同浓度PQ直接作用HL-60细胞,发现PQ对HL-60细胞的增殖有明显的抑制作用,作用时间越长,抑制作用越明显,且呈浓度依赖关系;PQ对HL-60细胞的致死率也随其浓度的增大而增大,较低浓度的PQ不同程度抑制HL-60细胞的生长,高浓度的PQ直接导致HL-60细胞死亡;HL-60细胞MDA含量随PQ的加入升高,而测定细胞总抗氧化能力发现细胞T-AOC下降,表明PQ对HL-60细胞造成氧化损伤,呈剂量效应;两种活性氧的检测结果显示,PQ处理HL-60细胞12h后,细胞O2·-和H2O2含量与对照组相比均有显著提高,H2O2含量与对照组相比提高程度比O2·-高且有剂量依赖性,这说明在HL-60细胞PQ中毒中期,H2O2对细胞的损伤起着比较关键的作用。2.四种抗氧化剂对百草枯诱导HL-60细胞中毒的保护观察GSH、NAC、SOD、CAT对PQ诱导HL-60细胞中毒的保护,显示它们不同程度的提升了细胞增殖率,GSH和NAC较SOD和CAT持续时间长,且能有效的降低细胞MDA含量和提升总抗氧化能力。对于PQ诱导HL-60细胞中毒保护作用,GSH最为明显,而SOD最不明显,NAC和CAT的效果则在两者之间。
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全文目录
摘要 6-7 ABSTRACT 7-8 1 前言 8-16 1.1 除草剂百草枯概况及毒性 8-10 1.1.1 百草枯使用现状 8-9 1.1.2 百草枯中毒 9-10 1.2 活性氧与抗氧化剂 10-13 1.2.1 自由基、活性氧与氧应激 10-11 1.2.2 抗氧化酶和抗氧化剂对自由基损伤的防御 11-13 1.3 百草枯中毒机理的研究进展及活性氧在其毒性中的作用 13-15 1.4 本文研究的目的 15-16 2 材料和方法 16-20 2.1 材料 16 2.1.1 细胞株 16 2.1.2 药品 16 2.1.3 试剂 16 2.1.4 仪器 16 2.2 方法 16-20 2.2.1 细胞培养 16-17 2.2.2 细胞样品处理 17 2.2.3 细胞增殖分析 17 2.2.4.MDA含量的测定 17-18 2.2.5 总抗氧化能力的测定 18-19 2.2.6 活性氧检测 19 2.2.7 数据处理 19-20 3 结果 20-35 3.1 百草枯对HL-60细胞的毒性作用 20-30 3.1.1 抑制HL-60细胞增殖 20-22 3.1.2 对HL-60细胞MDA含量和T-AOC的影响 22-24 3.1.3 诱导HL-60细胞活性氧升高 24-30 3.2 四种抗氧化剂缓解百草枯诱导HL-60细胞毒作用 30-35 3.2.1 减轻百草枯对HL-60细胞增殖抑制 30-33 3.2.2 使HL-60细胞MDA含量下降和T-AOC升高 33-35 4 讨论 35-39 4.1 建立人急性早幼粒白血病HL-60细胞百草枯损伤模型 35 4.2 百草枯诱导产生活性氧致HL-60细胞中毒 35-37 4.3 四种抗氧化剂对百草枯诱导HL-60细胞中毒的保护 37-39 参考文献 39-45 致谢 45
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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