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活性氧参与百草枯诱导的HL-60细胞毒及抗氧化剂的保护作用

作 者: 杨洋
导 师: 王勤
学 校: 兰州大学
专 业: 生物物理学
关键词: 百草枯 HL-60细胞 活性氧 过氧化氢 超氧阴离子 抗氧化剂 抗氧化酶
分类号: R733.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2007年
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内容摘要


为了在细胞水平研究活性氧百草枯(paraquat, PQ)毒性中的作用,本研究选用人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞株,建立了HL-60细胞PQ损伤模型。通过测定PQ作用HL-60细胞后对细胞增殖的抑制;细胞丙二醛(malondialedhyde, MDA)含量与总抗氧化能力(total antioxidation capability, T-AOC)的变化;细胞中超氧阴离子(O2·-)与过氧化氢(H2O2)含量变化,分析了PQ对HL-60细胞的毒性作用,并初步探讨谷胱甘肽(glutathione, GSH)、N-乙酰-L-半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine, NAC)、超氧化物岐化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)对PQ诱导HL-60细胞中毒的保护。主要研究内容和结果如下:1.百草枯诱导产生活性氧致HL-60细胞中毒不同浓度PQ直接作用HL-60细胞,发现PQ对HL-60细胞的增殖有明显的抑制作用,作用时间越长,抑制作用越明显,且呈浓度依赖关系;PQ对HL-60细胞的致死率也随其浓度的增大而增大,较低浓度的PQ不同程度抑制HL-60细胞的生长,高浓度的PQ直接导致HL-60细胞死亡;HL-60细胞MDA含量随PQ的加入升高,而测定细胞总抗氧化能力发现细胞T-AOC下降,表明PQ对HL-60细胞造成氧化损伤,呈剂量效应;两种活性氧的检测结果显示,PQ处理HL-60细胞12h后,细胞O2·-和H2O2含量与对照组相比均有显著提高,H2O2含量与对照组相比提高程度比O2·-高且有剂量依赖性,这说明在HL-60细胞PQ中毒中期,H2O2对细胞的损伤起着比较关键的作用。2.四种抗氧化剂对百草枯诱导HL-60细胞中毒的保护观察GSH、NAC、SOD、CAT对PQ诱导HL-60细胞中毒的保护,显示它们不同程度的提升了细胞增殖率,GSH和NAC较SOD和CAT持续时间长,且能有效的降低细胞MDA含量和提升总抗氧化能力。对于PQ诱导HL-60细胞中毒保护作用,GSH最为明显,而SOD最不明显,NAC和CAT的效果则在两者之间。

全文目录


摘要  6-7
ABSTRACT  7-8
1 前言  8-16
  1.1 除草剂百草枯概况及毒性  8-10
    1.1.1 百草枯使用现状  8-9
    1.1.2 百草枯中毒  9-10
  1.2 活性氧抗氧化剂  10-13
    1.2.1 自由基、活性氧与氧应激  10-11
    1.2.2 抗氧化酶和抗氧化剂对自由基损伤的防御  11-13
  1.3 百草枯中毒机理的研究进展及活性氧在其毒性中的作用  13-15
  1.4 本文研究的目的  15-16
2 材料和方法  16-20
  2.1 材料  16
    2.1.1 细胞株  16
    2.1.2 药品  16
    2.1.3 试剂  16
    2.1.4 仪器  16
  2.2 方法  16-20
    2.2.1 细胞培养  16-17
    2.2.2 细胞样品处理  17
    2.2.3 细胞增殖分析  17
    2.2.4.MDA含量的测定  17-18
    2.2.5 总抗氧化能力的测定  18-19
    2.2.6 活性氧检测  19
    2.2.7 数据处理  19-20
3 结果  20-35
  3.1 百草枯对HL-60细胞的毒性作用  20-30
    3.1.1 抑制HL-60细胞增殖  20-22
    3.1.2 对HL-60细胞MDA含量和T-AOC的影响  22-24
    3.1.3 诱导HL-60细胞活性氧升高  24-30
  3.2 四种抗氧化剂缓解百草枯诱导HL-60细胞毒作用  30-35
    3.2.1 减轻百草枯对HL-60细胞增殖抑制  30-33
    3.2.2 使HL-60细胞MDA含量下降和T-AOC升高  33-35
4 讨论  35-39
  4.1 建立人急性早幼粒白血病HL-60细胞百草枯损伤模型  35
  4.2 百草枯诱导产生活性氧致HL-60细胞中毒  35-37
  4.3 四种抗氧化剂对百草枯诱导HL-60细胞中毒的保护  37-39
参考文献  39-45
致谢  45

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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