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大豆和水稻中转基因成分的快速检测技术开发

作　者: 杜正平
导　师: 曹以诚；李志勇
学　校: 华南理工大学
专　业: 生物工程
关键词: 转基因农作物核酸检测计算机模拟筛选环介导等温核酸扩增法
分类号: S511
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 156次
引　用: 1次
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内容摘要

转基因技术的发展给人们的生活带来了更多的机遇。通过生物技术可使品种改良如产量增加、品质提高、抗性增强,包括抗虫、抗旱、抗病、抗逆等,但200多年来的工业文明告诉人类,科学是一把双刃剑,在给人类带来无限益处的同时,也引起了人们的担忧。从转基因技术诞生至今,人类一直进行着有关转基因技术的食品安全、环境风险、生态安全、社会伦理道德以及国际经济和政治安全等一系列问题的思考及争论。因此,转基因植物的检测的愈发重要,只有准确地检测转基因农作物,才能有效的对上市的转基因食品进行监控。并且在进出口贸易中,检测转基因农作物也是重要的一个环节。其中RRS转基因大豆和BT63转基因大米的检测是最近的研究热点。本论文建立了用环介导等温核酸扩增法检测转基因农作物的方法,与蛋白检测、普通PCR、荧光PCR这些传统检测转基因农作物的方法相比,具有灵敏度高、特异性高,操作简便、快速,以及成本较低廉等特点。首先,通过对多种转基因成分的序列结构进行分析,比较突变频率、片段保守性分析等,然后用计算机模拟筛选对设计出的引物进行末端能量状态分析、二级结构分析、相互作用分析、特异性筛选。设计出的引物能达到:高覆盖度,即能扩增所有靶标片段;高特异性,即对其它作物和生物基因不会有扩增而造成可能的假阳性。其次,采用QPCR的标准方法对比三种不同的核酸提取方法,综合性能和价格选择出可应用于检测实践的试剂盒,以进行下一步的实验操作。最后以环介导等温扩增法比照QPCR的标准方法,进行特异性和灵敏度实验,筛选得到了对2个内源基因,4个外源基因检测的环介导等温扩增法引物。这套提取方法结合反应与产物检测体系的检测流程,整体特异性和灵敏度都达到了欧盟检测的标准,为下一步制订行业或国家标准奠定了重要的基础。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-10
第一章绪论  10-41
  1.1 全球转基因农作物现状及争议  10-18
    1.1.1 全球转基因植物的发展概况  10-13
    1.1.2 中国转基因植物的发展概况及影响  13-15
    1.1.3 转基因产品的安全性问题  15-17
    1.1.4 转基因产品历史上引起的重大经济影响  17-18
  1.2 转基因作物常用检测技术及我国检测标准综述  18-28
    1.2.1 检测蛋白质的技术  18-20
    1.2.2 检测核酸的技术  20-25
    1.2.3 化学指纹图谱技术  25
    1.2.4 我国各类检测标准  25-27
    1.2.5 检测方法的评价及展望  27-28
  1.3 环介导等温扩增技术概述  28-39
    1.3.1 环介导等温扩增技术起源  28
    1.3.2 环介导等温扩增法的特点  28-29
    1.3.3 环介导等温扩增法的基本原理  29-33
    1.3.4 环介导等温扩增法产物的检测方法  33-35
    1.3.5 环介导等温扩增法的应用  35-36
    1.3.6 环介导等温扩增法存在的问题和改进  36-39
  1.4 本论文的研究意义及研究内容  39-41
    1.4.1 研究背景及意义  39-40
    1.4.2 主要研究内容  40-41
第二章环介导等温扩增法引物设计软件开发及转基因大豆与水稻检测引物设计  41-63
  2.1 环介导等温扩增法引物设计软件的开发  41-54
    2.1.1 环介导等温扩增法引物设计的关键因素  41-44
    2.1.2 环介导等温扩增法引物设计软件流程及主要源代码  44-54
  2.2 转基因大豆与水稻基因环介导等温扩增法引物设计  54-63
    2.2.1 RRS 大豆基因结构分析及引物设计  54-58
    2.2.2 BT63 水稻基因结构分析及引物设计  58-63
第三章环介导等温扩增法检测转基因作物研究及与现行标准方法比照  63-87
  3.1 筛选DNA 提取方法及试剂盒，提高大豆和水稻基因组DNA 提取质量  63-69
    3.1.1 实验材料  64
    3.1.2 实验方法  64-67
    3.1.3 实验结果与讨论  67-69
  3.2 环介导等温扩增法检测转基因BT63 水稻的引物筛选  69-75
    3.2.1 实验材料  69-70
    3.2.2 实验方法  70-71
    3.2.3 实验结果与讨论  71-75
  3.3 环介导等温扩增法检测转基因RRS 大豆的引物筛选  75-87
    3.3.1 实验材料  75
    3.3.2 实验方法  75-76
    3.3.3 实验结果与讨论  76-87
结论与展望  87-88
参考文献  88-95
致谢  95-96
攻读硕士学位期间取得的研究成果  96-97
附录  97

大豆和水稻中转基因成分的快速检测技术开发

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