学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

枸橼酸钾干预下肾结石大鼠肾组织Tamm-Horsfall蛋白的表达

作　者: 卢湧湧
导　师: 李新德
学　校: 浙江大学
专　业: 外科学
关键词: Tamm-Horsfall蛋白枸橼酸钾肾结石大鼠模型实验研究
分类号: R692.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 133次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的与背景：肾结石是泌尿外科常见病、多发病，发病率高，且随着生活水平的提高，其发病率呈上升趋势。因此肾结石的发生机制和防治研究一直是泌尿外科医师关注的问题。近年来国际上的研究发现Tamm-Horsfall蛋白（Tamm- Horsfall protein，THP）可能是一种抑制尿路结石形成的大分子有机物。但是THP抑制结石形成的机制及其所起的作用，不同的研究得到不同的结果，存在较大争议。虽然国外有研究者报道了肾结石大鼠肾脏组织THP表达的结果，但还没有治疗因素干预下肾结石大鼠肾脏组织THP表达的研究报道。枸橼酸是研究最早最充分的结石抑制因子之一，但其确切的防石机制，与其他大分子抑制因子之间的关系还有待于进一步研究。因此，我们研究枸橼酸钾干预下肾结石大鼠肾组织THP的表达，了解枸橼酸钾干预对肾组织THP表达的影响，进一步探讨枸橼酸钾抑制结石形成的机制，及枸橼酸钾与THP之间的相互关系，这不仅为解析肾结石发病机理提供实验依据，对临床寻求肾结石的防治途径也具有一定的指导意义。方法：1、动物和组织准备：选择20只雄性SD大鼠（由浙江大学附属邵逸夫医院动物实验室提供），体重约350g左右，以含有0.5％乙二醇和0.5％氯化铵的混合溶液为致石剂。先将大鼠正常条件下饲养一周，使其充分适应环境后，随机分成3组：对照组4只：喂普通净化饮用水；结石组8只，以致石剂代替饮用水；枸橼酸钾干预组8只，除以致石剂代替饮用水外，同时用25％枸橼酸钾溶液以1ml／100g体重每天灌胃一次。为使三组大鼠实验条件保持一致，结石组和对照组用净化水以1ml／100g体重每天灌胃一次。两周后处死大鼠，解剖取肾脏，肉眼下观察肾脏表面形态，再沿肾门长轴剖开，部分肾组织用10％甲醛固定，部分组织于解剖显微镜下观察肾剖面结石形成情况。2、结石形成观察：先肉眼观察肾脏表面形态，再将剖开的肾脏置于解剖显微镜下，观察肾剖面结晶结石的形成。以肾脏剖面有无明显结晶沉淀物、游离结石作为判断有无结石的标准。并根据结晶结石形成的量及肾脏损伤的程度分为四级，进行统计分析。3、肾组织THP表达强度测定：采用免疫组织化学法测定肾脏组织THP的相对表达量，使用SANTA CRUZ公司兔抗人Tamm-Horsfall蛋白291-425序列氨基酸多克隆抗体及羊抗兔ABC染色系统试剂盒。先将甲醛固定的肾脏组织脱水浸蜡包埋，3um厚切片，再脱蜡水化后，1％H₂O₂-PBS溶液封闭内生过氧化物酶，1.5％的血清阻断1小时，THP一抗（浓度：2ug／ml）或PBS阴性对照室温下孵育30分钟，生物素化羊抗兔二抗中孵育30分钟，卵白素和生物素化辣根过氧化物酶孵育30分钟，DAB显色5分钟，再苏木素复染，乙醇二甲苯脱水透明，中性树脂封片。最后于光学显微镜下观察，按“+++”表示明显染色（深棕黄色），“++”表示中度染色（黄色），“+”表示轻度染色（浅黄色），进行分级并统计分析。4、数据处理：通过SPSS13.0 for windows专业统计软件，采用Kruskal- Walls非参数检验对三组大鼠肾脏成石程度和THP表达强度进行统计分析，采用Mann-Whitney非参数检验对三组大鼠肾脏成石程度和THP表达强度进行两两比较。结果：1、肾脏结石的形成：肉眼观察三组肾脏表面大体形态，对照组大鼠肾脏外形无明显异常，质地软，未见钙化斑形成；结石组大鼠肾脏明显肿胀，质地变硬，肾表面可见大量浅黄色钙化斑，部分钙化斑融合；枸橼酸钾干预组大鼠肾脏稍肿胀，表面亦可见浅黄色钙化斑，但融合不明显。解剖显微镜下观察，对照组大鼠肾剖面均无可见的结晶结石沉淀物；结石组大鼠肾剖面嵌有大量的结晶，并可见游离结石形成；枸橼酸干预组大鼠肾剖面可见少量结晶沉淀，未见游离结石形成。对三组大鼠成石程度进行分级，采用Kruskal-Walls非参数检验对三组大鼠肾脏成石程度进行统计学分析，三组之间成石程度存在显著差异（P＜0.01），采用Mann-Whitney非参数检验对三组大鼠肾脏成石程度进行两两比较，发现对照组与结石组之间、对照组与枸橼酸钾干预组之间及结石组与枸橼酸钟干预组之间成石程度均有显著差异。2、肾组织THP表达强度：三组大鼠肾脏组织的THP免疫组化染色均显示THP主要定位于肾小管亨氏襻和远曲小管，但是在相同稀释度的一抗和相同的实验条件下，三组大鼠肾脏组织内THP表达的强度差别很大。对照组THP染色很深，而结石组染色很浅，枸橼酸钾干预组则介于两者之间。按照上述标准对三组进行分级统计，采用Kruskal-Walls非参数检验对三组大鼠肾组织THP表达强度进行分析，发现三组间THP表达强度存在显著差异（P＜0.01），采用Mann-Whitney非参数检验对三组大鼠肾组织THP表达强度进行两两比较，发现对照组与结石组之间、对照组与枸橼酸钟干预组之间及结石组与枸橼酸钾干预组之间肾组织THP表达强度均有显著差异。3、肾脏成石程度与肾组织THP表达强度的关系：将每只大鼠肾脏成石程度与肾组织THP表达强度相对应，发现在结石形成强度为“+++”的结石组大鼠肾组织中THP表达明显减弱，多为“+”；而对照组大鼠及一只成石程度为“+”的枸橼酸钾干预大鼠，其肾组织THP表达则成强阳性“+++”。即肾脏内结石形成越明显，则肾组织内THP表达越弱，反之肾脏内结石形成越少，则肾组织内THP表达越强。结论：我们报道了在治疗因素干预下肾结石大鼠肾组织内THP表达量的变化。我们发现在枸橼酸钾的干预下，肾结石大鼠。肾组织THP的表达量得到了一定程度的恢复，但枸橼酸钾干预导致这种改变的具体机制，仍需要更深入的研究。

全文目录

一、中文摘要  3-7
二、英文摘要  7-11
三、论文正文  11-26
  1、引言  11-12
  2、方法  12-14
  3、结果  14-19
  4、讨论  19-21
  5、结论  21-22
  6、参考文献  22-26
四、综述  26-35
五、致谢  35

枸橼酸钾干预下肾结石大鼠肾组织Tamm-Horsfall蛋白的表达

内容摘要

全文目录

相似论文