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樱桃番茄种质资源遗传多样性及杂交种纯度鉴定RAPD分析

作　者: 朱海生
导　师: 林义章；温庆放
学　校: 福建农林大学
专　业: 蔬菜学
关键词: 樱桃番茄 种质资源 遗传多样性 纯度鉴定 RAPD
分类号: S641.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 193次
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内容摘要


樱桃番茄（Lycopersicon Esculentum var.Cerasiforme Alef）为茄科番茄属的一种草本植物。起源于南美洲的秘鲁、厄瓜多尔、玻利维亚等热带国家。樱桃番茄果实酸甜可口,营养丰富,可溶性固形物高达7-8度,每100克鲜果中含水分94克左右,碳水化合物2.5-3.8克,蛋白质0.6-1.2克,维生素C20-30毫克,以及胡萝卜素、维生素B、矿物质等,可供生食、煮食或制成罐头贮藏,具有独特风味,是一种高档水果型蔬菜。樱桃番茄作为番茄属9个种中的一种,它的种群内不同个体间的遗传变异十分丰富,但是樱桃番茄的分子标记包括RAPD标记目前几乎是空白,这势必影响樱桃番茄种质资源的收集、保存、鉴定、利用和遗传育种。 本研究采用随机扩增多态性DNA（Random Amplified Polymorphic DNA）分子标记技术,首次对福建省农科院蔬菜研究中心的32个国内外樱桃番茄品种进行遗传多样性和分子鉴定研究,分析这些品种之间的亲缘关系,进行种质资源遗传多样性分析和品种鉴定,旨在为种质资源鉴定和杂交育种提供一定的理论依据。本研究开展了: 1、建立了樱桃番茄RAPD分析的技术体系:25ng模板DNA,0.4μmol.L-1引物,0.15mmol.L-1dNTP,1UTaqDNA聚合酶,1.5mmol.L-1MgCl2,2.5μL10×PCR缓冲液,加入灭菌的超纯水至25μL。反应程序为:95℃预变性5min后进行下列循环,94℃变性1min,38℃退火1min,72℃延伸2min,循环数45,最后72℃延伸10min。 2、从200个随机引物中筛选出27个引物,共扩增出214条DNA谱带,其中多态条带139条,多态性程度为64.95%。每个引物可扩增出2-12条多态性谱带,平均每个引物产生7.93条,谱带大小为270-2000bp。D=0.33时,聚类分析将供试材料分为3类,野生种聚成一类,果皮为黄色和少数红色品种聚成一类,全部是红色聚成一类。发现樱桃番茄品种根据其重要特征,表现出一定的聚集趋势。 3、筛选出应用于樱桃番茄种子纯度鉴定的引物和建立了杂交种子的RAPD指纹图谱。从27条引物中筛选出了用于樱桃番茄种子纯度鉴定的引物18条:4条偏母型引物、5条偏父型引物、4条互补型引物、2条特异型引物及3条缺失型引物。利用互补型引物S172鉴定樱桃番茄种子纯度发现:21供试种子中有2个其他种子

全文目录


目录  4-6
缩略词对照表  6-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
1 前言  11-28
  1.1 RAPD技术及其应用  11-20
    1.1.1 RAPD技术的原理  11-12
    1.1.2 RAPD标记技术的优点  12-13
    1.1.3 RAPD技术的应用  13-18
    1.1.4 问题及讨论  18-20
  1.2 番茄RAPD标记的国内外研究现状  20-23
  1.3 杂交种品种鉴定和品种纯度分析现状  23-26
    1.3.1 鉴定种子纯度的标记  23-25
      1.3.1.1 形态标记  23-24
      1.3.1.2 细胞标记  24
      1.3.1.3 生化标记  24-25
      1.3.1.4 分子标记  25
    1.3.2 RAPD标记应用于种子纯度鉴定基本情况和原理  25-26
  1.4 本研究的意义  26-28
2 材料与方法  28-30
  2.1 实验材料  28-29
  2.2 主要仪器和试剂  29
    2.2.1 主要仪器  29
    2.2.2 试剂  29
  2.3 DNA的提取  29-30
  2.4 DNA的检测  30
  2.5 DNA扩增反应  30
  2.6 检测与成像  30
  2.7 数据分析  30
3 结果与分析  30-48
  3.1 DNA的质量  30-32
  3.2 体系优化  32-35
    3.2.1 DNA模板的浓度  32
    3.2.2 Mg~(2+)浓度  32-33
    3.2.3 dNTPs浓度  33-34
    3.2.4 TaqDNA聚合酶含量  34
    3.2.5 引物浓度  34-35
  3.3 樱桃番茄种质资源遗传多样性RAPD分析  35-44
    3.3.1 RAPD标记的多态性  35-41
    3.3.2 聚类分析  41-44
  3.4 樱桃番茄杂交种品种鉴定和纯度分析  44-48
    3.4.1 品种真实性鉴定与亲本多态性分析  44-45
    3.4.2 引物筛选  45-46
    3.4.3 DNA指纹图谱类型的建立  46-48
    3.4.4 F_1杂交种的纯度的RAPD检测  48
4 结果与讨论  48-54
  4.1 樱桃番茄DNA的提取质量  48-49
  4.2 樱桃番茄稳定的RAPD体系的建立  49-50
  4.3 关于RAPD的重复性和稳定性  50-51
  4.4 RAPD标记在樱桃番茄研究的可行性  51
  4.5 樱桃番茄品种的遗传多样性  51-52
  4.6 福建地区樱桃番茄种质的利用  52
  4.7 RAPD应用于种子纯度鉴定的遗传机理  52-53
  4.8 RAPD技术在杂交种鉴定和纯度分析应用中的可行性  53-54
  4.9 樱桃番茄杂种及种子纯度鉴定方法的建立  54
5 结论与展望  54-56
  5.1 结论  54-55
  5.2 展望  55-56
参考文献  56-65
附录1  65-67
附录2  67-69
致谢  69

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 蔬菜园艺 > 茄果类 > 番茄（西红柿）
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