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两种新的抑制素基因疫苗免疫大鼠的效果比较及作用机制分析

作　者: 邢朝芳
导　师: 杨利国
学　校: 南京农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 抑制素 基因免疫 卵泡发育 生殖 内分泌
分类号: S852.52
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要


本研究应用双拷贝抑制素与乙肝表面抗原基因的融合表达质粒pCISI和pEGISI免疫大鼠,通过分析免疫原种类、免疫剂量、免疫次数对免疫应答、卵泡发育和生殖内分泌激素水平的影响,旨在比较两种抑制素基因疫苗的效果,探讨抑制素基因免疫的作用机制。 1 抑制素基因免疫的免疫反应性及其影响因素 将90只大鼠随机分为9组(n=10)。采用大鼠股四头肌三点注射法,每次免疫前24小时注射0.5%盐酸普鲁卡因100μL。6个实验组:2种真核表达质粒(pCISI和pEGISI)分别按10μg/100μL、50μg/100μL、100μg/100μL共3个剂量于预处理相同部位注射;3个对照组:生理盐水组注射100μL生理盐水,对照质粒1组注射100μ/100μL pcMV-S,对照质粒2组注射100μg/100μL pEGFP-N1,注射方法同试验组。首次免疫4周后加强免疫1次,免疫剂量、方法同首次免疫。 6个实验组抗体阳性率在10%～50.0%,抗体阳性组与抗体阴性组的吸光值比值(P/N值)最高为8.98。pCISI两次免疫大鼠,可获得23.3%(7/30)抗抑制素抗体阳性鼠,加强免疫后4周,100μg剂量组抑制素抗体P/N值明显高于10μg和50μg组,但免疫剂量的增加并没有增加抗体阳性鼠的比例。pEGISI两次免疫大鼠,可获得20.0%(6/30)的抗体阳性鼠,增加免疫剂量可提高抗体水平和抗体阳性鼠的比例。以上研究结果表明,抑制素与乙肝表面抗原融合基因表达质粒免疫大鼠可产生抗抑制素抗体。综合分析免疫鼠的抗抑制素抗体水平及阳性鼠的抗体水平,发现pCISI免疫大鼠,50μg剂量免疫产生的抗体水平最高;pEGISI免疫大鼠,100μg剂量免疫产生的抗体水平最高。免疫剂量的增加并不一定能增加抗体阳性鼠的比例。 2 抑制素基因免疫对大鼠生殖及生殖内分泌的影响 pCISI免疫大鼠,100μg免疫组的成熟卵泡发育数比对照组增加了6.4个(P<0.05),而用pEGISI免疫大鼠,10μg、50μg、100μg剂量组成熟卵泡发育数比对照组分别多4.3、6.4和5.8个(P<0.05)。pCISI两次免疫后,100μg剂量组卵泡发育程度明显提高(P<0.05)。pCISI加强免疫4周时的FSH水平实验组与对照组之间没有显著差异(P>0.05),pEGISI免疫大鼠,50μg、100μg剂量组动情期血浆FSH水平高于对照组,且明显高于10μg剂量组动情期血浆FSH水平(p<0.05)。pCISI两次免疫大鼠后的血

全文目录


全文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-13
第一篇 文献综述  13-31
  抑制素免疫和卵泡抑制素基因免疫研究进展  13-31
    1 抑制素特性  13
    2 抑制素常规免疫  13-16
      2.1 抑制素常规免疫的免疫原种类  14
      2.2 抑制素常规免疫的方法  14-16
        2.2.1 抑制素主动免疫  14-15
        2.2.2 抑制素被动免疫  15-16
    3 卵泡抑制素基因免疫  16-21
      3.1 卵泡抑制素基因免疫的作用机制探讨  16-18
        3.1.1 卵泡抑制素基因免疫的基本原理  16-17
        3.1.2 抑制素对下丘脑-垂体-性腺轴的调控  17-18
      3.2 卵泡抑制素基因免疫对动物生殖的影响  18
      3.3 影响抑制素基因免疫效果的因素  18-21
        3.3.1 免疫原  19
        3.3.2 免疫佐剂  19-20
        3.3.3 接种方法  20
        3.3.4 免疫剂量、免疫间隔与免疫次数  20-21
    4 卵泡抑制素基因免疫安全性研究  21-24
      4.1 WHO及FDA对DNA疫苗安全性的有关规定  21
      4.2 抑制素基因免疫安全性研究进展  21-24
        4.2.1 质粒整合  22
        4.2.2 抑制素基因免疫对宿主产生的毒副作用  22-23
        4.2.3 抑制素基因免疫后的持续表达导致免疫耐受性  23
        4.2.4 抑制素基因免疫后的持续表达导致自身免疫性  23-24
        4.2.5 抑制素基因免疫持续表达可能导致宿主的病理损伤  24
    4 参考文献  24-31
第二篇 实验研究  31-56
  实验一 两种抑制素基因疫苗免疫大鼠的免疫反应性及其与免疫剂量的关系  31-41
    1 材料与方法  31-35
      1.1 材料  31-32
      1.2 仪器  32
      1.3 方法  32-35
        1.3.1 质粒的大量制备及纯化  32-33
          1.3.1.1 质粒的大量培养  32
          1.3.1.2 质粒的大量抽提  32-33
          1.3.1.3 质粒的浓缩  33
        1.3.2 免疫准备  33-34
          1.3.2.1 实验分组  33-34
          1.3.2.2 免疫过程  34
          1.3.2.3 血样采集  34
        1.3.3 抗抑制素抗体检测  34-35
      1.4 数据分析  35
    2 结果与分析  35-38
      2.1 双拷贝抑制素基因免疫对大鼠抗体P／N值的影响  35-36
        2.1.1 双拷贝抑制素质粒pCISI免疫不同剂量组大鼠抗体P／N值  35-36
        2.1.2 双拷贝抑制素质粒pEGISI免疫不同剂量组大鼠抗体P／N值  36
      2.2 双拷贝抑制素基因免疫诱导的抗抑制素抗体阳性鼠的比例  36-38
        2.2.1 不同质粒免疫后抑制素抗体阳性鼠的比例  36-37
        2.2.2 pcISI免疫组抗抑制素抗体阳性鼠的比例  37-38
        2.2.3 pEGISI免疫组抗抑制素抗体阳性鼠的比例  38
    3 讨论  38-41
      3.1 抑制素表达质粒的免疫原性  38-39
      3.2 免疫剂量对免疫效果的影响  39
      3.3 加强免疫对免疫效果的影响  39-41
  实验二 两种抑制素基因疫苗免疫大鼠的生殖及生殖内分泌差异比较  41-56
    1 材料与方法  41-42
      1.1 材料与仪器  41
      1.2 免疫准备与实验动物分组  41
      1.3 卵泡发育观察  41-42
      1.4 血样检测  42
      1.5 数据分析  42
    2 结果  42-52
      2.1 双拷贝抑制素基因免疫对卵泡发育的影响  42-45
        2.1.1 双拷贝抑制素质粒pCISI免疫对大鼠卵泡发育的影响  42-44
        2.1.2 双拷贝抑制素质粒pEGISI免疫对大鼠卵泡发育的影响  44-45
      2.2 双拷贝抑制素基因免疫对生殖激素的影响  45-52
        2.2.1 双拷贝抑制素基因免疫对雌二醇的影响  46-48
          2.2.1.1 双拷贝抑制素质粒pCISI免疫对雌二醇的影响  46
          2.2.1.2 双拷贝抑制素质粒pCISI免疫对大鼠动情期血浆雌二醇的影响  46-47
          2.2.1.3 双拷贝抑制素质粒pEGISI免疫对大鼠雌二醇的影响  47-48
          2.2.1.4 双拷贝抑制素质粒pEGISI免疫对大鼠动情期血浆雌二醇的影响  48
        2.2.2 双拷贝抑制素质粒免疫对孕酮的影响  48-50
          2.2.2.1 双拷贝抑制素质粒pCISI免疫对大鼠不同时期孕酮的影响  48-49
          2.2.2.2 双拷贝抑制素质粒pCISI免疫对大鼠动情期血浆孕酮的影响  49
          2.2.2.3 双拷贝抑制素质粒pEGISI免疫对大鼠不同时期孕酮的影响  49-50
          2.2.2.4 双拷贝抑制素质粒pEGISI免疫对大鼠动情期血浆孕酮的影响  50
        2.2.3 双拷贝抑制素质粒对大鼠FSH的影响  50-52
          2.2.3.1 双拷贝抑制素质粒pCISI免疫对大鼠FSH的影响  50-51
          2.2.3.2 双拷贝抑制素质粒pCISI免疫对大鼠动情期血浆FSH的影响  51
          2.2.3.3 双拷贝抑制素质粒pEGISI免疫对大鼠FSH的影响  51-52
          2.2.3.4 双拷贝抑制素质粒pEGISI免疫对大鼠动情期血浆FSH的影响  52
    3 讨论  52-56
      3.1 抑制素基因免疫对大鼠发情周期的影响  52-53
      3.2 双拷贝抑制素基因免疫对生殖活动的影响  53-54
        3.2.1 抑制素基因免疫对卵泡发育的影响  53
        3.2.2 抑制素基因免疫剂量与卵泡发育的关系  53-54
        3.2.3 抑制素基因免疫抗体水平与卵泡发育的关系  54
      3.3 抑制素基因免疫对生殖激素的影响  54-56
        3.3.1 抑制素基因免疫对血浆FSH的影响  54-55
        3.3.2 抑制素基因免疫对血浆雌二醇的影响  55
        3.3.3 抑制素基因免疫对血浆孕酮的影响  55-56
参考文献  56-60
全文结论  60-61
创新  61-62
致谢  62

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 血清学 > 免疫法预防（接种）
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