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禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体的制备及捕获ELISA方法的建立

作　者: 曹振
导　师: 苏敬良；田克恭；陈西钊
学　校: 中国农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 禽流感病毒 H5亚型单克隆抗体捕获ELISA
分类号: S852.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 226次
引　用: 4次
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内容摘要

禽流感（AI）是由A型流感病毒引起禽类（家禽和野禽）的感染或疾病综合征。世界上许多国家和地区都曾爆发过此病,给养禽业造成巨大的损失。同时,其对人类的公共卫生也造成了相当大的威胁。因此,研究AI意义重大。本研究将禽流感病毒（AIV）H5亚型分离株A/Chicken/Guangdong SZ/1/00（H5N1）（SZ）,接种9～11日龄SPF鸡胚,收集死亡鸡胚,经适当处理后免疫6～8周龄BALB/c小鼠。应用淋巴细胞杂交瘤技术,经细胞融合后通过血凝抑制试验（HI）进行筛选,得到2株稳定分泌抗AIV H5亚型血凝素蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为1E5,4A4。经鉴定,其免疫球蛋白亚型均为IgG1、Kappa链;细胞培养上清HI效价为2⁶～2⁸,腹水HI效价达2¹⁰～2¹⁶。此2株单克隆抗体（McAb）能与AIV H5亚型标准毒株及20株H5亚型国内分离株反应;而与2株H7亚型、15株H9亚型分离株以及AIV H1～H4、H6～H15亚型标准毒株均不反应;与新城疫病毒（NDV）、鸡产蛋下降综合征病毒（EDSV）无交叉反应。4A4杂交瘤细胞株McAb免疫印迹（Western-blot）结果显示,该单抗是针对AIV H5亚型血凝素蛋白的特异性McAb。利用获得的抗AIV H5亚型血凝素McAb,通过生物素——亲和素放大系统建立了单抗——生物素捕获ELISA检测方法。结果表明,该方法特异性强,能够检出H5N3标准毒株和所有20株国内AIV H5亚型分离株,与其它14株AIV血凝素亚型的标准毒、2株AIV H7亚型和15株AIV H9亚型分离株及NDV、传染性法氏囊病毒（IBDV）和EDSV均无交叉反应。该方法对于快速检测H5亚型的AIV具有良好的应用前景。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-6
缩略词  6-8
第一章引言  8-18
第二章禽流感病毒 H5亚型血凝素单克隆抗体的制备  18-37
  2．1 试验材料  18-24
  2．2 试验方法  24-30
  2．3 结果  30-35
  2．4 讨论  35-37
第三章禽流感病毒H5亚型单抗捕获ELISA方法的建立  37-45
  3．1 试验材料  37
  3．2 试验方法  37-39
  3．3 结果  39-43
  3．4 讨论  43-45
第四章结论  45-46
参考文献  46-52
致谢  52-53
作者简介  53

禽流感病毒H5亚型血凝素单克隆抗体的制备及捕获ELISA方法的建立

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