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宁康霉素产生菌BAC-9912的诱变育种及培养条件的研究

作　者: 孙冬雪
导　师: 王丽；胡江春
学　校: 东北师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 地衣芽孢杆菌紫外诱变亚硝基胍琼脂块大通量法二剂量法正交试验
分类号: TQ464
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

海洋环境独特,其高压、高盐、低营养、低温的特点,被认为是生命活动的极端环境,这种环境造就了微生物种类及代谢途径的特异性,可产生完全不同于陆地微生物的新颖生物活性物质。因此,海洋微生物将是今后获得新的医用、农用抗生素的重要资源。海洋细菌 BAC-9912 是分离自大连渤海流域的一株产生抗真菌活性物质的细菌,通过系统的细菌分类学鉴定和 16SrRNA 序列分析,被定名为地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)。BAC-9912 能够利用常规培养基产生抗菌活性物质,活性很强,是一种有广泛应用前景的广谱抗生素,命名为宁康霉素(Nincomycin)。本论文通过紫外线和亚硝基胍对宁康霉素产生菌 BAC-9912 诱变和筛选,获得两株高产菌株 9912-7-2U(UV 处理获得)和 9912-2U-32N(NTG 处理获得),其摇瓶效价分别为 17646.4iu/ml 和 21780.8iu/ml。比出发菌株效价分别提高 126.9%和 180.0%。连续传代摇瓶效价稳定。初步建立了形态观察法、琼脂块大通量法两种初筛模型。通过单因子和正交试验,优化菌株 9912-7-2U 和 9912-2U-32N 摇瓶发酵条件。确定最佳发酵培养基:葡萄糖 2.5%,酵母膏 1.5%, KH2PO4 0.04%,FeSO40.02%,ZnSO40.01%;最佳发酵条件:接种龄 9912-7-2U 为 14h,9912-2U-32N 为 12h,接种量 5%,初始 pH9912-7-2U 为 6.0,9912-2U-32N 为 7.2,发酵时间 26h,装液量25ml/250ml,培养温度 28℃。应用二剂量法测定 9912-7-2U 和 9912-2U-32N 抗生素的相对效价,分别为 21111.5u/ml 和 23195.6u/ml,较原始发酵培养基和发酵条件(17136.6u/ml 和 18172.4u/ml)分别提高了 23.2%和 27.6%。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-5
目录  5-6
第一章引言  6-17
  1.1 海洋微生物产生抗生素类生物活性物质的研究  6-12
  1.2 农用抗生素育种技术的研究  12-16
  1.3 论文工作的目的  16-17
第二章材料与方法  17-21
  2.1 实验材料  17
  2.2 实验方法  17-21
    2.2.1 菌株的自然分离  17-18
    2.2.2 菌悬液的制备  18
    2.2.3 紫外线和亚硝基胍诱变  18
    2.2.4 初筛  18
    2.2.5 复筛  18-19
    2.2.6 摇瓶发酵  19
    2.2.7 抑菌活性的测定  19
    2.2.8 效价测定  19-20
    2.2.9 正交试验法进行培养基的优化  20-21
第三章结果与讨论  21-36
  3.1 不同诱变条件的诱变效果  21
  3.2 紫外线诱变剂量与致死率的关系  21-22
  3.3 致死率与正变率之间的关系  22
  3.4 紫外线对9912－7 菌株突变株产素的变势  22-23
  3.5 诱变后高产菌株的初筛  23-25
  3.6 高产菌株的复筛  25
  3.7 高产菌株摇瓶发酵和遗传稳定性实验  25-26
  3.8 海洋地衣芽孢杆菌 BAC-9912-U2G 和BAC-9912-U2G-32N 的培养基和培养条件的优化  26-34
  3.9 讨论  34-36
结论  36-37
参考文献  37-43
致谢  43

宁康霉素产生菌BAC-9912的诱变育种及培养条件的研究

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