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丹参多糖的提取及生物活性的研究

作　者: 吴从平
导　师: 王宪泽
学　校: 山东农业大学
专　业: 生物化学与生物分子学
关键词: 丹参多糖提取工艺分子量抗肿瘤免疫力抗疲劳
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

丹参(Radix et Rhizoma Salviae Miltiorrhiza)为唇型科植物,是我国常用大宗药材,具有广泛的药理作用,药材使用量逐年增加。丹参多糖(salvia miltiorrhiza polysaccharideJ ,SMP)是一类天然高分子化合物,具有调节免疫系统、抗氧化以及抗衰老等作用,具有巨大的开发潜力。有关丹参化学成分的研究已有不少报道,但对其多糖的研究,特别是对影响多糖提取影响因素的研究较少。为此,本研究从丹参根部水溶性部分提取分离出多糖成分,探讨其可溶性多糖提取过程中的影响因素,并通过正交试验确定其最适提取工艺参数。分析了多糖的单糖成分,测定了多糖的平均分子量。探讨了多糖的生物学特性,利用丹参多糖进行抗肿瘤试验的剂量筛选及多糖提高小鼠的耐缺氧能力,确定了抗肿瘤多糖的量效关系,以期为丹参多糖的进一步开发利用提供理论依据。主要结果如下:1、丹参水提最佳工艺为丹参重量与水的比值是1:20、提取时间4小时,乙醇浓度90%。超声波提取最佳工艺为丹参重量和水的比值1:20、提取时间40分钟,乙醇浓度90%。2、无论是白花丹参还是紫花丹参,叶中多糖含量丰富,根次之,茎中含量最少,白花丹参根茎叶各个部位中多糖含量比紫花丹参各部位均高。同一时期采集的不同亚种的丹参多糖含量不同,白花丹参含量比紫花丹参多糖含量高。不同时期采集的根部,多糖含量也不同,10月份采集的根部多糖含量比5月的要高。3、多糖脱去游离的蛋白质,经过分离得到两个均一组分,经过HPLC分析两个组分的平均分子量分别为1.389×10~6,4.028×10~5。单糖组分分析主要为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、鼠李糖。4、高剂量组与空白对照组比较,巨噬细胞的吞噬率、吞噬指数有显著性差异(P<0.05),说明SMP有明显增加小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率、吞噬指数,升高正常小鼠非特异性免疫功能的作用;环磷酰胺+高剂量组与单独环磷酰胺组比较,脾指数、胸腺指数均存在显著性差异(P<0.05),说明高剂量丹参多糖有明显改善环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的作用。高剂量的SMP能刺激T淋巴细胞的转化,改善T淋巴细胞的增值能力,说明丹参多糖能通过增强免疫作用来抑制肿瘤细胞的生长,且相对没有副作用,是比较理想的抗肿瘤中药。5、不同剂量的SMP均能不同程度的延长小鼠在密闭缺氧条件下的存活时间,从100—400ml/kg剂量组的存活时间与对照组比较差异显著(P<0.01),其中以200ml/kg延长率最大优于其他各剂量组。6、通过负重游泳持续时间直接观察到了丹参多糖能延长小鼠的游泳时间,其机理是多糖能改善机体能量代谢,减少蛋白质和含氮化合物分解,从而降低血尿素氮,具有抗疲劳作用。

全文目录

符号说明  4-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-11
1 引言  11-28
  1.1 丹参的重要化学成分及保健功能  11-13
    1.1.1 丹参的形态及重要化学成分  11
    1.1.2 丹参的保健功能  11-13
  1.2 多糖的分离纯化  13-17
    1.2.1 多糖的提取  13-14
    1.2.2 多糖的分离纯化  14-15
    1.2.3 纯度检测  15-16
    1.2.4 分子量测定  16
    1.2.5 结构分析  16-17
  1.3 多糖的生理功能  17-27
    1.3.1 多糖对免疫系统的影响  17-19
    1.3.2 多糖对免疫细胞信息传导的影响  19-21
    1.3.3 多糖受体对免疫影响  21-22
    1.3.4 多糖类中药抗肿瘤机制  22-27
  1.4 本研究目的意义  27-28
2 材料与方法  28-35
  2.1 实验材料  28
  2.2 主要试剂与仪器  28-29
    2.2.1 主要试剂  28-29
    2.2.2 主要仪器  29
  2.3 实验方法  29-35
    2.3.1 丹参多糖的分离纯化  29-32
    2.3.2 SMP 对小鼠免疫力的影响  32-33
    2.3.3 SMP 抗肿瘤作用  33-34
    2.3.4 SMP 的耐缺氧抗疲劳作用  34-35
3 结果与分析  35-50
  3.1 热水浸提法  35-37
    3.1.1 浸提比对多糖提取的影响  35-36
    3.1.2 浸提时间对多糖提取的影响  36
    3.1.3 乙醇沉淀浓度对多糖提取的影响  36-37
  3.2 超声波提取法  37-44
    3.2.1 超声提取正交实验  37-38
    3.2.2 浸提比对多糖提取的影响  38
    3.2.3 浸提时间对多糖提取的影响  38-39
    3.2.4 乙醇沉淀浓度对多糖提取的影响  39-40
    3.2.5 白花丹参与紫花丹参多糖含量的测定  40-42
    3.2.6 SMP 分子量,纯度鉴定,单糖组分,蛋白含量  42-44
  3.3 SMP 生物学特性  44-50
    3.3.1 SMP 对小鼠免疫力的影响  44-46
    3.3.2 SMP 抗肿瘤作用  46-48
    3.3.3 SMP 的耐缺氧抗疲劳作用  48-50
4.讨论  50-53
5.结论  53-55
参考文献  55-61
致谢  61

丹参多糖的提取及生物活性的研究

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