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猕猴桃根活性成分的提取、分离纯化及其保肝功能评价的研究

作　者: 王岁红
导　师: 李忠海
学　校: 中南林业科技大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 猕猴桃根多糖熊果酸提取纯化保肝作用
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

猕猴桃(Kiwifruit)属猕猴桃科,落叶木质藤本,在我国分布广泛。猕猴桃的根或根皮含有多糖及苷类,萜类成分,鞣质,甾体、黄酮类等化学成分,具有健胃、清热、解毒、利湿、祛风的作用。因此,对猕猴桃根重要活性成分进行提取分离纯化工艺的研究以及对各提取物进行保肝功能的评价具有十分重要的意义。本文以产自湘西凤凰的野生猕猴桃根和人工种植的“米良一号”猕猴桃根为原料,对其中多糖和熊果酸的提取、分离纯化工艺进行研究,并且对两种提取物进行保肝功能的比较研究,主要研究结果如下：1.采用三元二次通用旋转法,确定野生猕猴桃根中多糖微波水提工艺最优条件为固液比(g：mL)1.8：30,萃取温度61.5℃,萃取时间33.5 min,在此条件下,多糖的理论得率为12.34%,实际得率为12.34±0.01%,RSD=1.28%(n=5)。2.对野生猕猴桃根粗提物进行初步纯化后,二乙基氨基(DEAE)纤维素柱层析纯化的结果表明以0.1～1.0mol/L的NaCl溶液为洗脱剂的多糖洗脱效果最佳。在此条件下,控制流速1.2mL/min将猕猴桃根粗多糖进一步纯化得到三个组分PK1、PK2和PK3,多糖得率分别为62.87%、8.24%、15.39%。通过理化性质鉴定反应以及紫外光谱分析的结果表明经DEAE-纤维素柱层析的猕猴桃根多糖PK1、PK2和PK3组分中含量均达到90%以上,其中PKl组成均一,符合国家中药新药的要求。3.采用四元二次回归通用旋转法,确定野生猕猴桃根中熊果酸的微波提取工艺最优条件为：乙醇浓度72.8%,固液比(g：mL)为4.2：25,萃取时间18.9 min,萃取温度90.0℃,熊果酸微波萃取的理论得率为5.68%,验证实验值为5.66±0.01%,RSD=1.43%(n=5)。4.通过薄层层析(TLC)实验研究发现,熊果酸经过乙酸乙酯萃取后可以达到初步纯化的目的,然后经真空浓缩可以得到熊果酸粗粉。通过对硅胶柱层析的洗脱溶剂的配比、硅胶粒径大小的研究发现,在氯仿与甲醇的配比为18：1,粒径为100-200目时,熊果酸的纯度最高,达到85%以上,而且提取率也在65%以上。5.以小白鼠为实验对象,以小鼠肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)的活力、丙二醛(MDA)的含量、血清中丙氨酸氨基转移酶(AST)以及天门冬氨酸氨基转移酶(ATL)的活性为测定指标,探讨野生和“米良一号”猕猴桃根的不同提取物对CCl4致小鼠肝损伤的保护作用。实验结果表明：与模型组比较,野生和“米良一号”猕猴桃根提取物各剂量组都有不同程度的保肝作用,其各自三种不同提取物的保肝效果顺序均为：粗三萜类化合物>水相粗提物>粗多糖。且野生猕猴桃根粗三萜类化合物的保肝效果要比“米良一号”猕猴桃根的好,存在着种属差异。从剂量上来说,’两种猕猴桃根的粗三萜类化合物剂量组中均以高剂量组的效果最好,其次是中剂量组,再次是低剂量组,即呈现一定的正相关。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-12
1 绪论  12-23
  1.1 猕猴桃概述  12-13
    1.1.1 猕猴桃的形态特征  12
    1.1.2 猕猴桃的资源分布与种植史  12
    1.1.3 猕猴桃的主要成分  12-13
    1.1.4 猕猴桃的作用  13
  1.2 猕猴桃根概述  13-17
    1.2.1 猕猴桃根的形态特征  13
    1.2.2 猕猴桃根的主要成分  13-15
    1.2.3 猕猴桃根及其活性成分的生理功效  15-17
  1.3 多糖研究概述  17-20
    1.3.1 多糖的生物活性  17-18
    1.3.2 多糖的分离纯化  18-19
    1.3.3 多糖的应用前景  19-20
  1.4 熊果酸研究概述  20-22
    1.4.1 熊果酸生物活性概述  20
    1.4.2 熊果酸的分离纯化  20-21
    1.4.3 熊果酸的纯度鉴定  21
    1.4.4 熊果酸的含量测定  21-22
    1.4.5 熊果酸的应用前景  22
  1.5 本课题研究的目的及意义  22-23
2 猕猴桃根多糖微波萃取工艺研究  23-35
  2.1 材料与方法  23-26
    2.1.1 材料与试剂  23
    2.1.2 主要实验仪器  23
    2.1.3 实验方法  23-25
    2.1.4 数据处理方法  25-26
  2.2 结果与分析  26-34
    2.2.1 固液比对猕猴桃根多糖微波萃取的影响  26
    2.2.2 萃取温度对猕猴桃根多糖微波萃取的影响  26-27
    2.2.3 萃取时间对猕猴桃根多糖微波萃取的影响  27-28
    2.2.4 野生猕猴桃根多糖微波萃取三元二次回归通用旋转组合实验结果  28-31
    2.2.5 野生猕猴桃根多糖微波萃取工艺各因子交互作用曲面响应模型  31-32
    2.2.6 回归方程局部最优点的寻找  32-33
    2.2.7 野生猕猴桃根多糖微波萃取最优工艺验证实验结果  33
    2.2.8 野生猕猴桃根多糖微波萃取与热水浸提对比结果  33-34
  2.3 小结与讨论  34-35
3 猕猴桃根多糖的纯化  35-42
  3.1 材料与方法  35-38
    3.1.1 材料与试剂  35
    3.1.2 主要实验仪器  35
    3.1.3 实验方法  35-38
  3.2 结果与分析  38-41
    3.2.1 猕猴桃根多糖的初步纯化  38
    3.2.2 纤维素阴离子交换剂DEAE-纤维素柱层析  38-40
    3.2.3 纯度鉴定  40-41
  3.3 结论  41-42
4 猕猴桃根熊果酸微波萃取工艺研究  42-54
  4.1 材料与方法  42-45
    4.1.1 材料与试剂  42
    4.1.2 主要实验仪器  42
    4.1.3 实验方法  42-45
    4.1.4 数据处理方法  45
  4.2 结果与分析  45-53
    4.2.1 野生猕猴桃根熊果酸微波萃取四元二次回归通用旋转组合实验结果  45-48
    4.2.2 野生猕猴桃根熊果酸微波萃取工艺各因子及其交互作用影响分析结果  48-51
    4.2.3 野生猕猴桃根熊果酸微波萃取最优工艺验证实验结果  51-52
    4.2.4 野生猕猴桃根熊果酸微波萃取最优工艺验证实验结果  52-53
  4.3 小结与讨论  53-54
5 硅胶柱层析分离纯化熊果酸  54-59
  5.1 材料与方法  54-56
    5.1.1 试剂与仪器  54
    5.1.2 实验方法  54-56
  5.2 结果与分析  56-58
    5.2.1 薄层层析实验结果  56-57
    5.2.2 粒径选择  57
    5.2.3 洗脱溶剂的确定  57-58
    5.2.4 纯化产物纯度检测  58
  5.3 结论  58-59
6 猕猴桃根提取物对实验性肝损伤的保护作用  59-71
  6.1 材料与方法  59-62
    6.1.1 材料与试剂  59
    6.1.2 主要仪器  59
    6.1.3 实验方法  59-61
    6.1.4 统计方法  61-62
  6.2 结果与分析  62-69
    6.2.1 CCl_4对小鼠肝损伤的影响  62
    6.2.2 野生猕猴桃根提取物对CCl_4所致肝损伤小鼠SOD活力、MDA水平、AST、ALT水平的影响  62-65
    6.2.3 "米良一号"猕猴桃根提取物对CCl_4所致肝损伤小鼠SOD活力、MDA水平、AST、ALT水平的影响  65-68
    6.2.4 不同种属猕猴桃根提取物对CCl_4所致肝损伤小鼠的影响对比  68-69
  6.3 小结与讨论  69-71
7 结论与展望  71-74
  7.1 结论  71-72
    7.1.1 微波提取猕猴桃根多糖的最佳工艺  71
    7.1.2 猕猴桃根多糖的纯化以及理化性质  71
    7.1.3 微波提取猕猴桃根熊果酸的最佳工艺  71-72
    7.1.4 硅胶柱纯化猕猴桃根熊果酸  72
    7.1.5 猕猴桃根提取物对实验性肝损伤的保护作用  72
  7.2 展望  72-74
参考文献  74-80
附录  80-81
致谢  81

猕猴桃根活性成分的提取、分离纯化及其保肝功能评价的研究

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