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龙血生肌膏对大鼠失神经支配创面愈合过程中表皮干细胞分化影响的实验研究

作　者: 徐威
导　师: 王昌兴
学　校: 浙江中医药大学
专　业: 中医学
关键词: 龙血生肌膏去神经支配创面愈合实验研究
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的观察龙血生肌膏对大鼠失神经支配创面愈合的作用,并通过测定创面愈合过程中表皮干细胞(ESCs)的含量变化及其表面标记物β1整合素和角蛋白19(K19)的阳性表达情况,观测龙血生肌膏促进失神经支配创面愈合的疗效并探讨其可能的作用机理。方法清洁级健康SD雄性成年大鼠168只,体重220-250g。完全随机法分成4组即龙血生肌膏组(A组)、易孚对照组(B组)、失神经创面组(C组)、正常创面组(D组)。将A、B、C三组大鼠的T11、T12、T13、L1、L2脊神经根离断,在全部大鼠背侧做一直径为1.5cm的圆形深度达肌膜下2mm的组织缺损深创面。A组创面以龙血生肌膏外用；B组以易孚外用；C组、D组创面均以凡士林外用,创面以纱布包扎,每日定时换药1次,于造模后1天、4天、7天、11天、15天、21天、28天七个时间点观察记录创面的愈合情况、计算创面面积和完全愈合时间并取创面组织,制备组织切片进行HE常规组织学染色、β1整合素和角蛋白19(K19)的免疫组织化学染色。光镜下观察HE染色各组创面组织形态学变化；对创面中成纤维细胞进行人工计数；光镜下观察免疫组化染色β1整合素和K19的表达变化；用图像分析仪及分析软件对β1整合素进行OD值分析,对角蛋白19(K19)行阳性细胞率统计。所得结果用SPSS17.0统计软件进行统计学处理。结果①大体观察：龙血生肌膏组和易孚组创面湿润,渗出较多,肉芽组织增生和再上皮化明显,优于非治疗组；同时,正常创面组愈合情况也优于失神经创面组。龙血生肌膏组稍优于易孚组,但两者无明显差别。②愈合时间比较：龙血生肌膏组比易孚组的创面愈合时间缩短,虽两者无明显差别,但均较非治疗组缩短,差异有统计学意义(P<0.05),失神经创面组愈合时间比正常创面组明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。③创面愈合率比较：各时间点龙血生肌膏组比易孚组的创面愈合率稍高,虽两者无显著性差异,但均高于非治疗组,差异有统计学意义(P<0.05),失神经创面组愈合率低于正常创面组,差异有统计学意义(P<0.05)。④HE观察结果比较：创面愈合过程中,龙血生肌膏组比易孚组在创面炎细胞浸润、肉芽组织增生和成纤维细胞的数量等方面更优于非治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。⑤创面组织中β1整合素OD值比较：龙血生肌膏组、易孚组、正常组与失神经支配组比较均有统计学意义(p<0.05),第21天创面完全愈合时与失神经支配组无差别(p>0.05)；龙血生肌膏组、易孚组均是在第11天达到峰值,而正常组则延迟至第15天；在造模后的第11天和第15天龙血生肌膏组的OD值稍高于易孚组,但两者无显著性差异。⑥创面组织中K19阳性细胞数比较：造模后各时间点龙血生肌膏组、易孚组和正常组创面K19的阳性细胞数均高于失神经组,差异有统计学意义(P<0.05)；从造模后第4天开始龙血生肌膏组、易孚组与正常组比较差别有统计学意义(P<0.05)；龙血生肌膏组、易孚组均是在第11天达到峰值,而正常组则延迟至第15天；第21天创面完全愈合时,龙血生肌膏组、易孚组与失神经组比较差别仍有统计学差异(P<0.05)。结论：1.龙血生肌膏能明显加快失神经支配创面愈合的速度；2.龙血生肌膏有效促进失神经支配创面愈合的机制可能与其能够加快ESCs增殖分化及其表面标记物β1整合素、K19阳性表达有关。

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中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
前言  8-9
一、实验材料与方法  9-13
  (一) 实验动物  9
  (二) 实验药品  9
  (三) 实验试剂  9
  (四) 实验器材  9-10
  (五) 实验方法  10-12
  (六) 统计方法  12-13
二、结果  13-18
  (一) 大体观察  13
  (二) 愈合时间比较  13-14
  (三) 愈合率比较  14
  (四) HE染色观察结果  14-16
  (五) 免疫组化染色结果  16-18
三、分析与讨论  18-25
  (一) 龙血生肌膏组方解析  18
  (二) 动物模型制备依据  18-19
  (三) 祖国医学及现代医学对创面愈合的认识  19-20
  (四) 实验观察指标选择依据  20-21
  (五) 实验结果分析  21-25
结论  25-26
参考文献  26-29
附图  29-36
致谢  36-37
综述  37-41
  参考文献  40-41

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