学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

氧化应激损伤在H1N1型流感病毒致宿主细胞凋亡中的研究

作　者: 刘彦明
导　师: 肖洪广
学　校: 广州医学院
专　业: 临床检验诊断学
关键词: H1N1型流感病毒狗肾细胞细胞凋亡氧化损伤丙二醛 8-氧鸟嘌呤核苷流式细胞仪
分类号: R511.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 13次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

流行性感冒是严重影响人类健康的最常见的原因之一。进入21世纪以来,2006年的H5N1型禽流感、今年爆发流行的H1N1型流感,都给人类的工作和生活带来严重影响。正因如此,流感病毒致病机理的研究一直都是医学研究的热点。目前,为广大学者所接受的致病机理中,流感病毒诱导细胞凋亡和氧化应激损伤机制都是重要的学说,但关于两种机制之间关系的研究国内外未见报道。其它领域的研究证明,氧化应激可通过多条途径导致细胞凋亡的发生。Xu JJ等人通过对培养的心肌细胞研究,证明了氧化应激与凋亡之间的关系[1];研究还发现在非肥胖糖尿病鼠胰岛中存在过度氧化所致的凋亡现象[2]。在立足国内外研究进展和流感病毒致病机制的基础上,本研究将从新的视角探讨流感病毒所致的细胞凋亡与氧化应激损伤之间的关系。目的本课题旨在证明研究氧化应激损伤在流感病毒感染并最终致宿主细胞凋亡的过程中的存在;流感病毒感染宿主细胞可导致脂质氧化损伤和DNA、RNA碱基氧化损伤。同时,通过对宿主细胞氧化损伤程度与流感病毒致宿主细胞凋亡之间的关系研究,揭示流感病毒致宿主细胞的氧化损伤在宿主细胞凋亡中的作用。加强对流感病毒致宿主细胞氧化应激机制的认识,为该病毒致病机理研究提供了新的思路,为抗流感药物的开发提供新的靶点,也为高致病性人禽流感的预防、防控提供了新的视角和依据。方法第一部分流感病毒实验用毒剂量确定鸡胚尿囊腔接种H1N1型流感病毒,经病毒复制、扩增、收获病毒,通过检测MDCK细胞的半数组织细胞感染剂量(TCID50),确定该毒株实验用毒剂量,并经预试验给予验证。第二部分流感病毒感染MDCK细胞后的凋亡率检测利用Annexin V-FITC/ PI试剂盒检测病毒感染MDCK细胞1h后继续培养0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h各时间点的凋亡率。第三部分流感病毒感染MDCK细胞后MDA的含量检测利用MDA检测试剂盒检测病毒感染MDCK细胞1h后继续培养0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h各时间点的MDA含量。第四部分流感病毒感染MDCK细胞后8-oxo-G表达情况检测细胞爬片经过不同的预处理,利用免疫组织化学染色SP法检测病毒感染MDCK细胞1h后继续培养0h、1h、3h、6h、12h、24h、48h各时间点的DNA中的8-oxo-G和RNA中8-oxo-G表达情况。结果1.该毒株感染MDCK细胞的TCID50为10-4.5/0.1ml,经预实验验证确定毒株的实验用毒剂量为100 TCID50。2.该毒株的实验用毒剂量能感染并诱导MDCK细胞的凋亡,且凋亡率随着检测时间延长呈上升趋势,前6h凋亡率与对照组无明显差异(P>0.05),12h凋亡率开始上升达6.422%±0.326(P<0.01),24h、48h分别为9.570%±0.229、9.178%±0.286,与对照组有明显差异(P<0.01)。3.病毒感染细胞后,MDA含量随着检测时间的延长而下降,0h MDA水平达高峰1.490±0.053nmol/mgprot(P<0.01),1-6h维持在较高水平,依次为1.221±0.036 nmol/mgprot,1.157±0.061 nmol/mgprot,1.089±0.038 nmol/mgprot(P<0.01),12h后MDA水平明显下降至0.636±0.033 nmol/mgprot (P<0.01),24h、48h MDA水平与对照组比较无显著性差别(P>0.05)。4.该毒株感染MDCK细胞后,能诱导宿主细胞DNA和RNA中8-oxo-G的表达。DNA中8-oxo-G表达情况如下:含8-oxo-G的阳性细胞百分比随着时间呈明显上升趋势(P<0.05)。0h阳性细胞百分比已达12.20±3.16(P<0.05),之后的1h、3h、6h、12h、24h阳性细胞百分比逐渐上升,各时间点阳性细胞百分比与对照组差异明显(P<0.01),48h阳性细胞百分比达到最高87.45±3.98(P<0.01)。RNA中8-oxo-G表达情况如下:该毒株感染细胞之后,RNA中8-oxo-G表达情况随时间呈明显上升趋势(P<0.05),各时间点实验组8-oxo-G阳性细胞表达情况依次为9.93±1.45;12.38±1.92;26.70±0.86;46.55±2.92;58.89±2.02;72.72±2.13;80.63±0.97(P<0.01)。同时,细胞DNA中8-oxo-G阳性百分比在1h、3h、6h、12h明显高于同时间点细胞RNA中。结论经研究发现:H1N1型流感病毒能明显诱导宿主MDCK细胞凋亡,凋亡率随着检测时间延长升高;H1N1型流感病毒感染宿主MDCK细胞过程中存在脂质氧化损伤,丙二醛浓度随检测时间推移呈下降趋势,且凋亡率和MDA含量有高度三次方线性关系,关系方程为Y=23.09-42.17X+29.82X2-7.16X3,曲线的决定系数R2为0.99880; H1N1型流感病毒感染宿主MDCK细胞之后引起细胞DNA和RNA鸟嘌呤的氧化损伤产物8-oxo-G的高表达,且在DNA中的阳性百分比明显强于RNA中的,这是导致细胞凋亡因素之一。

全文目录

英文缩略词  4-5
中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
前言  12-15
  一、流感病毒致病机制研究现状  12-13
  二、氧化应激损伤研究现状  13-14
  三、氧化应激与细胞凋亡的关系  14-15
材料和方法  15-29
  实验材料  15-18
  试验方法  18-29
    第一部分流感病毒实验用毒剂量确定  21-22
    第二部分流感病毒感染MDCK 细胞后的凋亡率检测  22-23
    第三部分流感病毒感染MDCK 细胞后MDA 的检测  23-25
    第四部分免疫组化法检测染毒宿主细胞DNA 和RNA 中8-oxo-G 表达情况  25-29
结果  29-40
  第一部分流感病毒实验用毒剂量确定  29-30
  第二部分流感病毒感染MDCK 细胞后的凋亡率检测  30-32
  第三部分流感病毒感染MDCK 细胞后MDA 的检测  32-34
  第四部分免疫组化法检测染毒宿主细胞DNA 和RNA 中8-oxo-G 表达情况  34-40
讨论与课题展望  40-42
结论  42-43
参考文献  43-47
综述  47-54
  参考文献  51-54
攻读学位期间获得的研究成果  54-55
致谢  55-56

氧化应激损伤在H1N1型流感病毒致宿主细胞凋亡中的研究

内容摘要

全文目录

相似论文