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GBE对SD大鼠原代肝星状细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

作　者: 国丽
导　师: 张汝建
学　校: 泰山医学院
专　业: 内科学
关键词: 肝星状细胞细胞分离细胞增殖凋亡循环灌流细胞外基质
分类号: R575.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的探讨SD大鼠原代肝星状细胞(Hepatic Stellate Cell, HSC)体外培养中,不同浓度的银杏叶提取物对其增殖、凋亡及胶原合成的影响方法1.采用改良的胶原酶消化法原位分离SD大鼠HSC。2.0.4%台盘蓝染色计算产量及存活率、显微镜下观察细胞形态、结蛋白免疫细胞化学染色鉴定分离的HSC。3.实验分组：正常对照组、GBE各浓度处理组(0、1、10、100、500μg/ml),分别用MTT法观察GBE对HSC的增殖影响、ANNEXIN V FITC/PI双染、流式细胞仪技术检测HSC凋亡情况、ELISA方法检测细胞的胶原合成。结果1.原代分离的HSC得率为2-5×107/每只大鼠,纯度大于95%,活率大于90%。2.GBE各浓度处理组：1μg/mlGBE抑制率为7.83%,10μg/mlGBE抑制率为21.5%,100μg/mlGBE抑制率为32.4%,500μg/mlGBE抑制率44.8%,随GBE处理浓度增加,对HSC增殖抑制程度增加,有统计学差异(P<0.05)。3.ANNEXIN V FITC/PI双染显示随着GBE浓度的增加,HSC凋亡率逐渐增加(P<0.01)4.ELISA方法检测细胞的胶原合成显示,随GBE浓度的增加,Ⅳ型胶原合成的含量逐渐降低,与对照组之间存在明显差异(P<0.05),透明质酸(Hyaluronic Acid, HA)含量逐渐降低,与对照组之间存在明显差异(P<0.01),并成剂量依赖性。结论1.采用原位压力灌流及循环灌流能成功实现大鼠肝星状细胞的分离及培养,原代分离的大鼠HSC经培养活化后可以用于肝纤维化的研究。2.银杏叶提取物可明显抑制肝星状细胞的增殖和促进其凋亡,明显下调透明质酸、Ⅳ型胶原的含量,从而发挥抗肝纤维化并逆转纤维化的作用。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-7
符号说明  7-8
前言  8-10
第一部分大鼠肝星状细胞的分离提纯、培养和鉴定  10-30
  材料与方法  12-17
  结果  17-18
  讨论  18-22
  结论  22-23
  附图  23-30
第二部分银杏叶提取物对SD大鼠肝星状细胞凋亡、增殖和胶原合成的影响  30-48
  材料与方法  31-35
  结果  35-38
  讨论  38-42
  结论  42-43
  附图  43-48
参考文献  48-54
综述  54-63
  参考文献  61-63
致谢  63-64

GBE对SD大鼠原代肝星状细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

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