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CC型趋化因子CCL20及其受体CCR6在早期硬皮病皮损中的表达及意义

作　者: 李林
导　师: 谭志建；陶娟
学　校: 华中科技大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 硬皮病趋化因子 CCL20(MIP-3α)
分类号: R593.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 45次
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内容摘要

目的:探究CC型趋化因子CCL20及其受体CCR6在早期硬皮病患者皮损中的表达,研究CCL20/CCR6是否参与硬皮病的发生和发展。方法:一.免疫组织化学及荧光定量PCR分别检测早期硬皮病患者皮损中CC型趋化因子CCL20及其受体CCR6蛋白及mRNA的表达。二.采用组织块培养法分别分离硬皮病患者及正常人真皮成纤维细胞,以含10%胎牛血清DMEM培养基进行体外原代培养。通过形态学及免疫细胞化学的方法对其进行鉴定,MTT法测细胞的增殖。分别用不同浓度的Th1及Th2细胞因子进行处理,在不同的时间点分别取上清行ELISA,细胞mRNA作实时定量PCR检测。三.检测成纤维细胞产生的CCL20的趋化活性,并比较硬皮病成纤维细胞和正常成纤维细胞所产生的CCL20的趋化活性是否有差异。结果:一.CCL20及其受体CCR6蛋白及mRNA在早期硬皮病皮损中的表达增加,而且二者在皮损中的分布部位一致。二.体外原代培养的皮肤成纤维细胞可快速稳定增殖。硬皮病患者真皮成纤维细胞和正常人真皮成纤维细胞在形态学和免疫细胞化学上无明显差异。基础状态下,CCL20 mRNA及蛋白质在两种细胞中均很低,但在硬皮病患者真皮成纤维细胞表达水平较正常人真皮成纤维细胞高;Th1型细胞因子(TNF-αand IL-1β)能够随剂量和时间的增加显著提高成纤维细胞CCL20的表达水平;相反,硬皮病患者真皮成纤维细胞CCL20的表达水平则随Th2型细胞因子(IL-4)浓度和时间的增加而降低。三.重组型及成纤维细胞上清中的CCL20对PBMCs的趋化功能呈浓度依赖性。两种成纤维细胞上清的CCL20较重组型CCL20对PBMCs具有更强的趋化活性;硬皮病患者真皮成纤维细胞上清中的CCL20的趋化活性较正常皮肤成纤维细胞高;CCL20抗体能完全阻断重组型CCL20的趋化活性,但对硬皮病患者成纤维细胞上清PBMCs的趋化活性仅能阻断43.98±10.48%。结论:1. CC型趋化因子CCL20及其受体CCR6参与了硬皮病早期的发生和发展,对硬皮病皮损中单个核细胞的浸润起到重要作用。2.硬皮病患者的成纤维细胞处于持续活化状态,能够自身及在促炎症性细胞因子的刺激下合成CCL20。3.除CCL20外,成纤维细胞还可能合成其他趋化因子,共同趋化MNCs进入硬皮病皮损中。

全文目录

缩略词及中英文对照  6-8
中文摘要  8-10
Abstract  10-12
前言  12-13
材料与仪器  13-15
实验步骤及实验方法  15-26
实验结果  26-31
讨论  31-34
参考文献  34-37
综述  37-52
  参考文献  48-52
附录  52-53
致谢  53

CC型趋化因子CCL20及其受体CCR6在早期硬皮病皮损中的表达及意义

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