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sTNFR-Fc在CIA模型鼠中的疗效观察及其对OPN的影响

作　者: 吕志芬
导　师: 陶怡
学　校: 广州医学院
专　业: 风湿免疫学
关键词: CIA sTNFR-Fc 滑膜 关节软骨 TNF-α OPN SB203580 MAPK
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 22次
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内容摘要


目的:观察肿瘤坏死因子-α可溶性受体融合蛋白(sTNFR-Fc)在胶原诱导型关节炎(CIA)模型鼠中对滑膜、关节软骨等的保护作用,并检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和骨桥蛋白(OPN)的表达情况,观察sTNFR-Fc对OPN表达的影响,并分析TNF-α和OPN间的关联及可能的信号转导途径。方法:采用牛源性二型胶原配合不完全弗氏佐剂在鼠尾根部及背部多点皮下注射乳剂0.4ml制造CIA模型,第13天开始对治疗组采用sTNFR-Fc腹腔注射治疗(10mg/kg,隔日一次),每周测量体重及踝关节的前后径,第35天放射线观察膝关节、踝关节关节间隙、骨质等有无破坏。第36天处死大鼠,HE及甲苯胺蓝染色观察踝关节组织病理变化并进行病理评分;ELISA检测血浆TNF-α和OPN水平,免疫组化检测踝关节TNF-α和OPN的组织学表达,取正常对照组和模型组膝关节滑膜,胶原酶消化法分别培养成纤维滑膜细胞,分成正常对照组、模型组、模型组+脂多糖(LPS)、模型组+脂多糖(LPS)+p38途径抑制剂(SB203580),RT-PCR观察成纤维滑膜细胞OPNmRNA的变化,进一步分析TNF-α和OPN间的联系及可能的信号途径。结果:在造模过程中,正常对照组体重持续增长,处死前平均体重为202.3克,造模组和治疗组体重增长缓慢,造模组于28天后体重下降至基线水平附近,处死前平均体重为147.2克,治疗组平均体重为194.3克,三者两两间比较P<0.05,有统计学差异。前后径正常对照组平均为9.6度,造模组平均为13.27度,治疗组平均为11.5度,三者组间比较P<0.05,有统计学差异。单纯造模组HE染色可见滑膜重度增生,有大量浆细胞及淋巴细胞浸润,甲苯胺蓝染色可见软骨染色重度缺失;治疗组HE染色滑膜增生及炎症细胞浸润较造模组轻,甲苯胺蓝染色软骨染色丢失较单纯造模组为轻。病理评分定量分析结果示模型组与治疗组比较,治疗组关节病理评分显著降低[(8.16±1.02)vs(4.83±1.44),P<0.05] ;ELISA结果示模型组平均血浆TNF-α和OPN值分别为713.33±145.83pg/ml,4.34±0.56ng/ml,治疗组分别为67.62±20.05pg/ml,4.20±0.63ng/ml,两组间比较,血浆TNF-α值有统计学差异(P<0.05),而OPN值无统计学差异(P=0.688);免疫组化显示OPN主要表达在滑膜衬里层、软骨表面,模型组与治疗组间比较有统计学差异(P<0.05)。RT-PCR结果示:模型组细胞加入LPS刺激后OPNmRNA表达明显增多,予p38MAPK途径抑制剂处理后,可显著减少OPNmRNA的表达,四组间比较均有统计学差异((P<0.05)结论:病理组织学评分及ELISA检测结果均显示sTNFR-Fc治疗作用良好,能显著减轻CIA模型鼠关节及软骨的破坏,并能显著减少OPN在关节滑膜的表达,延缓病情的进展。但不能减少OPN在外周血浆中的表达,推测其原因可能为OPN不直接参与炎症的发展过程,而主要参与骨质的破坏及吸收过程。TNF-α的表达增加可诱导OPN的表达,p38MAPK途径在其发挥着重要的作用。

全文目录


中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
前言  7-13
  1.1 类风湿关节炎概述  7
  1.2 类风湿关节炎的发病机制  7-10
  1.3 类风湿关节炎的生物疗法  10
  1.4 骨桥蛋白与 RA  10-11
  1.5 MAPK 及 P38 通路对炎症反应的调控  11-12
  1.6 LPS 与 TNF-α  12
  1.7 课题研究思路  12-13
材料和方法  13-23
  2.1 材料  13
  2.2 方法  13-23
结果  23-29
  3.1 实验动物入选情况  23
  3.2 体重及周径变化  23-24
  3.3 放射线改变  24
  3.4 关节病理评分  24-25
  3.5 血浆中 TNF-α 及 OPN ELISA 结果  25
  3.6 OPN 在滑膜的定量分析  25-26
  3.7 各组大鼠 TNF-a 的表达比较(SP×400 倍)  26-27
  3.8 滑膜成纤维细胞原代培养  27
  3.9 RT-PCR 结果  27-29
讨论  29-34
结论  34-35
参考文献  35-39
附图  39-43
综述  43-52
  参考文献  49-52
致谢  52-53

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病 > 自身免疫性疾病、结缔组织疾病 > 类风湿性关节炎
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