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卡介苗多糖核酸下调急性哮喘小鼠CD4~+T细胞IL-17的表达

作　者: 朱岳
导　师: 向旭东
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: 哮喘急性 CD4~+T细胞 Th17/IL-17 卡介苗多糖核酸糖皮质激素
分类号: R562.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景：支气管哮喘是由嗜酸性粒细胞、肥大细胞和T淋巴细胞等多种炎性细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。以往研究证实,支气管哮喘的发病与Thl/Th2失衡有着密切关系。但最近研究显示Th17细胞(IL 17)及其它细胞因子在哮喘小鼠动物模型的发病机制中有重要作用。卡介菌多糖核酸(BCG—PSN)作为一种免疫调节物质,可以抑制气道反应性和气道嗜酸粒细胞的浸润,抑制Th2反应,增强Thl反应,减轻气道反应,但卡介苗多糖核酸是否能抑制IL-17的表达从而来减轻气道炎症尚未见报道。目的：观察卡介苗多糖核酸和地塞米松对哮喘小鼠脾源性CD4+T细胞IL-17表达的影响。方法：10只SPF级雌性BALB/C小鼠随机分为两组：哮喘组(5只)以OVA致敏、激发；正常对照组(5只)以等体积的PBS代替OVA致敏、激发,末次激发24小时后处理小鼠。查看小鼠的一般行为活动；雾化吸入Ach行支气管激发试验,有创肺阻抗法测定小鼠的气道反应性；BALF行细胞学分类、计数；HE染色观察肺组织的病理变化。研磨小鼠脾脏制成单个核细胞悬液,裂解红细胞,免疫磁珠分离小鼠脾源性CD4+T细胞,分为正常对照组,而哮喘小鼠脾源性CD4+T细胞分为哮喘未干预组、哮喘BCG-PSN干预组和哮喘地塞米松干预组,悬于加有胎牛血清的RPMI-1640培养液、ConA和PMA等刺激培养24小时后,计算正常对照组及哮喘未干预组脾源性CD4+T细胞总数；流式仪检测正常对照组和哮喘未干预组Th17细胞的阳性率；ELISA法测定正常对照组和哮喘未干预组脾源性CD4+T细胞培养上清液和BALF中的工L-17浓度；Western Blot和Real Time PCR分别测定测定正常对照组、哮喘未干预组、哮喘BCG-PSN干预组和哮喘地塞米松干预组脾源性CD4+T细胞中IL-17蛋白和IL-17mRNA表达。结果：(1)哮喘组小鼠出现类似于人的哮喘发作症状,而正常对照组小鼠表现正常;(2)与正常对照组相比,哮喘组小鼠对Ach的刺激反应明显,浓度反应曲线上移(均P<0.01)；(3)与正常对照组相比,哮喘组小鼠肺组织支气管及血管周围大量炎性细胞(包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞)浸润(P<0.01)；(4)与正常对照组相比,哮喘组小鼠BALF中白细胞总数、Neu(%).Eos(%)和Lym(%)显著增多(均P<0.01)；(5)与正常对照组相比,哮喘组小鼠BALF中IL-17浓度显著升高(P<0.01)；(6)哮喘未干预组小鼠BALF中IL-17的浓度与Neu(%)显著正相关(r=0.903,P<0.01)；(7)与正常对照组相比,哮喘未干预组小鼠脾源性CD4+T细胞总数和Th17细胞阳性率显著增高(均P<0.01)；(8)与正常对照组相比,哮喘未干预组小鼠脾源性CD4+T细胞培养上清液中IL-17的浓度显著升高(P<0.01)；(9)与正常对照组相比,哮喘未干预组小鼠脾源性CD4+T细胞中IL-17蛋白和IL-17mRNA的表达显著增高(P<0.01)；而哮喘BCG-PSN干预组和哮喘地塞米松干预组中小鼠脾源性CD4+T细胞中的IL-17蛋白和IL-17mRNA的表达均低于哮喘未干预组(均P<0.01),但前两者间无显著性差别(P>0.05)。结论：1.本实验中建立的急性哮喘小鼠模型是成功的；2.卡介苗多糖核酸可以下调急性哮喘小鼠CD4+T细胞源性IL-17的表达,且与地塞米松有相似的效应。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-14
前言  14-16
第一章材料与方法  16-34
  1.实验动物  16
  2 仪器设备与试剂  16-19
  3 试剂的配制  19-23
  4 实验方法  23-33
  5 统计分析  33-34
第二章结果  34-46
  1 各组小鼠的情况  34
  2 各组小鼠肺功能的检测  34-35
  3 各组小鼠肺组织病理结果  35-36
  4 各组小鼠BALF的细胞总数和分类计数  36-38
  5 各组小鼠脾源性CD4~T细胞总数和Tlh7细胞阳性率  38-40
  6 小鼠脾源性CD4~T细胞的活性  40
  7 正常对照组与哮喘未干预组小鼠BALF和脾源性CD4~T细胞培养上清中IL-71的浓度及其与中性粒细胞的相关性  40-41
  8.药物干预后小鼠脾源性CD4~T细胞的活性  41-42
  9 WB测定各组小鼠脾源性CD4~T细胞IL一17蛋白的表达  42-43
  10.eral-itmePCR检测小鼠脾源性CD4~T细胞LI-71mRNA的表达  43-46
第三章讨论  46-51
  一、哮喘小鼠模型的成功建立  46-47
  二、Th17/IL17与支气管哮喘  47-49
  三、磁珠分离、纯化小鼠脾源性CD4~T细胞  49
  四、地塞米松下调哮喘小鼠脾源性CD4~T细胞IL-71的表达  49
  五、卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)下调哮喘小鼠脾源性CD4~T细胞IL-17的表达  49-50
  六、总结  50-51
第四章结论  51-52
参考文献  52-56
综述  56-64
  参考文献  61-64
致谢  64

卡介苗多糖核酸下调急性哮喘小鼠CD4~+T细胞IL-17的表达

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