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表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG对人肝癌细胞株HepG2体外放疗的影响

作　者: 刘礼
导　师: 谢纪文
学　校: 华中科技大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 表没食子儿茶素没食子酸酯 人端粒酶逆转录基因 细胞凋亡 人肝癌细胞株HepG2 放疗增敏
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:研究相同剂量EGCG联合不同剂量放疗对HepG2中hTERT基因表达和细胞凋亡的影响,探讨EGCG成为放疗增敏剂的可能性。方法:用MTT法检测不同浓度EGCG(10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)对HepG2细胞增殖的影响;用荧光显微镜检测不同浓度EGCG做HepG2细胞凋亡实验;用实时荧光定量PCR检测不同浓度EGCG对HepG2中hTERT基因的表达的影响,从而找到合适的EGCG剂量用于观察其体外放疗的实验。用流式细胞仪检测不同剂量放疗(0GY、2GY、4GY、6GY)联合EGCG和不联合EGCG治疗后HepG2细胞凋亡率;用实时荧光定量PCR检测不同剂量放疗(0GY、2GY、4GY、6GY)联合EGCG和不联合EGCG治疗后,HepG2中hTERT基因的表达。放疗用直线加速器6MVX线。结果:MTT检测结果显示: EGCG抑制HepG2细胞生长,呈浓度依赖关系(R2=0.9558,P<0.05)。荧光显微镜结果显示:EGCG促进HepG2细胞的凋亡,呈浓度依赖关系。实时荧光定量PCR结果显示:10μmol/L组与0μmol/L组比,差异明显(P<0.01)且对hTERT呈上调作用;25μmol/L组与0μmol/L相比差异不明显(P>0.05),50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L组与0μmol/L组相比,均有明显差异(P<0.01)且对hTERT呈下调作用。根据以上实验结果,选择25μmol/LEGCG进行体外放疗的实验。实时荧光定量PCR结果显示:单用25μmol/LEGCG对HepG2中的hTERT基因并无显著影响,而经2Gy、4Gy、6Gy放射治疗后HepG2中的hTERT基因均有下调作用。0GY组与2Gy、4Gy、6Gy组均有显著性差异(P<0.05);2Gy组与4Gy组的差异有显著性意义(P<0.05), 2Gy组与6Gy组的差异有显著性意义(P<0.05); 4Gy组与6Gy组的差异无显著性意义(P<0.05)。提示,2Gy组的差异可能更为显著。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示:0GY组与2Gy、4Gy、6Gy组均有显著性差异(P<0.05);2Gy组与4Gy组的差异有显著性意义(P<0.05), 2Gy组与6Gy组的差异有显著性意义(P<0.05); 4Gy组与6Gy组的差异无显著性意义(P<0.05)。提示,2Gy组的差异可能更为显著。结论:不同剂量放疗联合25μmol/LEGCG具有下调不同剂量放射治疗HepG2中hTERT基因表达水平的作用。同时,不同剂量放疗联合25μmol/LEGCG提高不同剂量放射治疗后HepG2细胞凋亡率。从而,EGCG有可能具有放疗增敏的作用。

全文目录


中文摘要  5-7
Abstract  7-9
1 绪言  9-10
2 理论分析  10-15
  2.1 茶叶和 EGCG  10
  2.2 肝癌的研究进展  10-12
  2.3 放射增敏的研究进展  12-14
  2.4 端粒酶的研究进展  14-15
3 第一部分EGCG 对HepG2 细胞凋亡和hTERT 基因表达的影响  15-21
  3.1 实验材料  15
  3.2 实验装置  15-16
  3.3 实验方法  16-18
  3.4 实验结果  18-21
4 第二部分EGCG 对HepG2 细胞体外放疗的影响  21-26
  4.1 实验材料  21
  4.2 实验装置  21
  4.3 实验方法  21-22
  4.4 实验结果  22-26
5 结果分析和讨论  26-28
致谢  28-29
参考文献  29-34
附录 1 文献综述  34-40
  参考文献  38-40
附录 2 已修回的论文  40-49
附录 3 (攻读学位期间发表论文目录)  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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