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亚硒酸钠对胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及hTERT表达的作用及其机理研究

作　者: 王慧
导　师: 苏衍萍
学　校: 泰山医学院
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 亚硒酸钠 SGC-7901细胞株细胞凋亡端粒酶逆转录酶
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞株增殖、凋亡和hTERT表达的作用及其机理。方法亚硒酸钠(0、0.5、2.5、5、8μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24h、48h、72h、96h,用相差显微镜观察亚硒酸钠对SGC-7901形态的影响；MTT法检测亚硒酸钠对SGC-7901的增殖的影响；AnnexinV-FITC/PI双染法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞凋亡的影响；免疫细胞化学SABC法检测亚硒酸钠对SGC-7901 hTERT蛋白表达的影响；RT-PCR检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞hTERTmRNA水平表达的影响。结果在倒置相差显微镜下可见空白对照组细胞呈上皮型贴壁生长,如铺路石状,细胞轮廓清楚,细胞密集,胞质透亮,细胞生长旺盛,培养液较清澈。在亚硒酸钠作用下,0.5μmol/L,2.5μmol/L组细胞形态无明显改变。5μmol/L,8μmol/L组,细胞间接触变松,贴壁能力减弱,细胞密度降低,细胞开始出现胀亡样改变：细胞肿胀,轮廓不清,立体感差,胞质空泡及颗粒样物质增多,细胞膜破裂、细胞崩解成碎片,漂浮于培养液中,随亚硒酸钠浓度的升高,上述改变更加明显。MTT法检测结果显示：随浓度增加,吸光度值逐渐降低,24h当亚硒酸钠浓度大于2.5μmol/L寸,与空白对照组比较其吸光度值均明显降低(P<0.01),48h、96h实验各浓度亚硒酸钠组与空白对照组比较其吸光度值均明显降低(P<0.01)。随浓度的增加,亚硒酸钠对SGC-7901细胞增殖抑制率的作用逐渐增加。流式细胞仪检测结果显示：不同时间点0.5μmol/L, 2.5μmol/L亚硒酸钠组均较空白对照组凋亡发生率略有升高,5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组比空白对照组凋亡率明显升高(P<0.01)同一时间点凋亡发生率随亚硒酸钠浓度的增加而升高。免疫细胞化学法检测结果显示：亚硒酸钠能降低SGC-7901细胞中出(?)ERT蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD),24h时5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比MOD明显降低(P<0.01),48h时0.5μmol/L、5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比MOD明显降低(P<0.01),72h时2.5μmol/L 5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比MOD明显降低(P<0.01),96h时各实验组与空白对照组比较MOD均明显降低(P<0.01)。同一时间点,随亚硒酸钠浓度的增高hTERT蛋白MOD逐渐降低。RT-PCR检测结果显示：亚硒酸钠能降低SGC-7901细胞中hTERTmRNA的表达,24h时5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比较有统计学意义(P<0.05),48h,72h,96h时2.5μmol/L、5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结论亚硒酸钠能抑制SGC-7901细胞生长,诱导其凋亡,其发生可能与下调hTERT表达有关。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-7
符号说明  7-8
前言  8-10
材料与方法  10-23
结果  23-28
讨论  28-32
结论  32-33
附图  33-43
参考文献  43-46
综述  46-58
  参考文献  53-58
致谢  58-59
攻读学位期间发表的学术论文  59-60

亚硒酸钠对胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及hTERT表达的作用及其机理研究

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