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人胶质瘤中特异性miRNA功能的初步研究

作　者: 石磊
导　师: 尤永平
学　校: 南京医科大学
专　业: 神经外科
关键词: 微RNA 增殖 侵袭 凋亡 神经胶质瘤
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


研究背景：微小RNA(microRNAs，miRNA)是一类大小为20～25个核苷酸(nucleotide，nt)的非编码小RNA。成熟的miRNA与其靶信使R N A（messenger RNA，mRNA）完全或不完全配对后，通过切割或抑制靶mRNA的转录后翻译，参与调节生物的发育、细胞的分化、增殖和凋亡等。近年研究表明：miRNAs与肿瘤的发生、发展关系密切，某些miRNAs在胶质瘤中呈特异性表达。研究目的:目前超过400个人类miRNAs已被发现，然而对其功能作用还知之甚少，尤其是胶质瘤相关miRNA的功能研究报道不多。本课题旨在研究胶质瘤中特异性miRNAs表达谱及其功能，探寻可能存在的特异性miRNAs及在胶质瘤的发生发展过程中的作用和机制，为今后运用特异性miRNA沉默技术治疗胶质瘤提供新的靶点。研究方法：.筛选：收集病理确诊的不同恶性程度胶质瘤以及来源于重症脑外伤需减压患者的正常脑组织手术标本，利用miRNAs微阵列方法，结合国内外近期研究，筛选出在胶质瘤中的特异性表达的miRNAs。.验证：应用实时荧光定量PCR技术验证筛选出的特异性miRNAs在人脑胶质瘤组织和正常脑组织中的表达，并进一步比较相关特异性miRNAs表达情况与胶质瘤不同级别的相关性。.功能研究：选取人胶质瘤细胞系U87，TJ905和U251细胞，培养于含10%新生牛血清的DMEM（Gibco公司）培养基，并置于37℃、5% CO2孵箱中，取对数生长期细胞实验。实验分为特异性miRNAs组，阴性对照组和空白对照组。委托上海吉玛公司合成特异性miRNAs寡聚核苷酸，武汉晶赛公司构建特异性miRNAs表达载体，转染胶质瘤U87，TJ905和U251细胞，通过实时荧光定量PCR检测特异性miRNAs在胶质瘤组织和细胞中的表达情况。通过噻唑蓝（MTT）实验、Transwell实验、流式细胞仪（FCM）检测和软琼脂实验，观察上调或下调特异性miRNAs表达后对胶质瘤细胞增殖、侵袭、转化能力和细胞凋亡的影响。研究结果：. miR-21在人脑不同级别胶质瘤组织和U87细胞系中较正常脑组织高表达。抑制miR-21可有效抑制U87细胞增殖，诱导其凋亡，降低其侵袭能力；增加Caspase-3表达活性，活化Caspase-9表达，但不影响PTEN和Caspase-8表达。推测其诱导凋亡的机制可能是通过Caspase-9、3途径实现。. miR-181a和miR-181b在胶质瘤组织和细胞系U87，TJ905和U251细胞较正常脑组织均呈过低表达。miR-181a表达水平呈随胶质瘤级别增高而下降趋势，miR-181a表达水平与胶质瘤等级呈负相关；miR-181b在胶质瘤级别III级以上后表达水平趋于稳定，III级和IV级组织中的表达无明显差异；miR-181c表达量在正常脑组织与胶质瘤Ⅱ级和III级组织间差异不显著，在胶质瘤IV级组织miR-181c表达水平降低。.上调miR-181a和miR-181b表达能有效抑制胶质瘤细胞系U87，TJ905和U251细胞生长，降低其转化和侵袭能力，诱导其凋亡。研究结论：. miR-21在胶质瘤组织和U87细胞中呈高表达，下调miR-21在胶质瘤组织中表达，可有效抑制U87细胞增殖，诱导其凋亡，降低其侵袭能力。胶质瘤中异常高表达的miR-21可能发挥着抗凋亡因子作用。. miR-181a、miR-181b和miR-181c在胶质瘤组织和细胞系中呈不同程度低表达，miR-181a表达与胶质瘤级别呈负相关。胶质瘤中异常低表达的miR-181a和miR-181b可能发挥着肿瘤抑制因子作用。

全文目录


英文缩略词  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-12
前言  12-15
第一部分 人胶质瘤中特异性miRNAs 的寻找  15-21
  材料和方法  15-19
  结果  19-20
  讨论  20-21
第二部分 人胶质瘤中特异性miRNAs 的验证  21-31
  材料和方法  21-26
  结果  26-29
  讨论  29-31
第三部分 miR-21 在人胶质瘤细胞系 U87 细胞中作用机制的初步研究  31-49
  材料和方法  31-41
  结果  41-46
  讨论  46-49
第四部分 miR-181 家族（miR-181a 和miR-181b）的表达对脑胶质瘤细胞作用的初步研究  49-63
  材料和方法  49-57
  结果  57-61
  讨论  61-63
结论  63-64
参考文献  64-67
综述  67-87
  参考文献  81-87
攻读学位期间发表文章情况  87-89
致谢  89

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 神经系肿瘤
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