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HIV-1Rev基因编码蛋白在真核细胞系中的表达及其表达蛋白抑制KSHV溶解性周期复制和KSHV感染前列腺癌细胞的初步探索

作　者: 李久明
导　师: 华立新
学　校: 南京医科大学
专　业: 泌尿外科学
关键词: 人类免疫缺陷病毒1型 病毒颗粒蛋白表达调节因子 人类疱疹病毒8型 复制 感染
分类号: R737.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 3次
引　用: 0次
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内容摘要


人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染显著提高卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)感染者发生卡波济肉瘤(Kaposi’s sarcoma,KS)的风险。KSHV感染是KS发生的必要条件,但在没有其它协同因子作用时不足以引发KS,然而促使KSHV引发KS的因素还未完全清楚。之前我们研究已证实HIV-1反式激活蛋白(transactivative transcription protein,Tat)是激活KSHV裂解性周期复制的因素。本文拟构建含HIV-1病毒颗粒蛋白表达调节因子( regulator of virion protein expression,Rev)编码基因的pRev-Flag重组质粒并进行酶切鉴定和序列测定;将pRev-Flag重组质粒瞬时转染原发性渗出性淋巴瘤[primary effusion lymphoma,PEL,又称体腔淋巴瘤(body cavity-based lymphoma,BCBL)]来源的BCBL-1细胞和小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3,采用RT-PCR、Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Rev基因的表达情况;提取瞬时转染pRev-Flag重组质粒的BCBL-1细胞总RNA,进行Real-time PCR检测KSHV次要衣壳蛋白编码基因ORF26、KSHV周期复制的开关基因ORF50 mRNA和RT-PCR检测ORF26 mRNA转录水平;将BCBL-1细胞与PC-3共培养,细胞形态学观察培养后PC-3细胞变化,RT-PCR检测KSHV ORF26的表达。核酸序列分析结果表明,克隆的Rev基因序列与GenBank中已登记的Rev序列100%同源,RT-PCR和Western blot都在Rev预期位置检测到特异性条带。Real-time PCR和RT-PCR检测显示,Rev基因编码蛋白能够降低KSHV转录水平。细胞共培养显示PC-3细胞形态发生改变,RT-PCR检测到了ORF26的表达。本研究成功构建含Rev基因序列的重组质粒并在真核细胞BCBL-1和NIH/3T3细胞中获得正确表达;初步探索表明Rev基因编码蛋白能够抑制KSHV溶解性周期复制;KSHV能够感染前列腺癌细胞。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-8
前言  8-9
第一部分 重组质粒pRev-Flag 的构建及真核细胞中的表达  9-19
  引言  9
  材料和方法  9-16
  结果  16-19
第二部分 HIV-1 Rev 基因编码蛋白对KSHV溶解性周期复制影响和KSHV感染前列腺癌细胞初步探索  19-31
  引言  19
  材料和方法  19-24
  结果  24-29
  讨论  29-31
参考文献  31-35
综述  35-49
附录 1 试剂  49-52
附录 2 实验方法  52-62
攻读硕士学位期间公开发表的学术论文  62-68
致谢  68

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 男性生殖器肿瘤 > 前列腺肿瘤
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