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依达拉奉对慢性脑缺血鼠认知功能障碍与TGF-β_1、Bc1-2、MDA、SOD阳性表达影响的研究

作　者: 刘春寒
导　师: 薛慎伍
学　校: 泰山医学院
专　业: 内科学
关键词: 鼠慢性脑缺血认知功能自由基依达拉奉脑蛋白水解物(可维欣)
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

研究目的：探讨慢性脑缺血大鼠的空间记忆能力和额叶皮质、海马区自由基(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、转化生长因子β1 (TGF-β1)、Bcl-2因子阳性表达的动态变化及相互关系,药物依达拉奉对慢性缺血鼠认知功能障碍与TGF-β1、Bcl-2、SOD、MDA阳性表达影响的研究。实验过程中依达拉奉、脑蛋白水解物腹腔注射,观察治疗后大鼠记忆能力及自由基(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、与转化生长因子β(TGF-β1)、Bcl-2因子表达的变化规律,为临床寻找抗自由基和提高缺血后学习记忆能力,防治血管性痴呆药物提供理论依据。方法：选取健康雄性Wistar大鼠,采取永久性结扎大鼠双侧颈总动脉的方法,制备与人类慢性脑缺血比较相似的慢性脑缺血大鼠模型。术后3周开始给予依达拉奉(10mg/kg)或脑蛋白水解物注射液(5ml/kg)腹腔注射,每天一次,直至处死。手术后1、3、7、14、21、28天分别对术后大鼠进行卒中指数、神经病学症状评定。手术后2周、4周、8周、12周、16周应用Y迷宫检测各组大鼠的空间辨别记忆能力。采用HE染色,光镜观察各组大鼠脑组织的形态学变化情况；应用免疫组织化学方法检测大鼠额叶皮质及海马区转化生长因子β1 (TGF-β1)、Bcl-2凋亡因子表达的动态变化；应用光化学比色法测定自由基(MDA)超氧化物歧化酶(SOD)的变化。应用SPSS12.0软件进行统计学分析,首先进行正态分布及方差齐性检验,各组间比较用单因素方差分析,两两比较应用q检验。结果：1、慢性前脑缺血鼠认知功能改变双侧颈总动脉结扎后3天,卒中指数与神经病学指数两项指标均接近正常,无运动障碍。采用Y迷宫检测各组大鼠术后空间记忆能力,结果如下：术后2周大鼠记忆功能下降,个体差异很大,部分大鼠的Y迷宫正确次数明显减少；缺血4周时大鼠记忆能力比对照组明显下降,差异显著P(0.01。以后Y迷宫正确次数逐渐减少,缺血4个月时与对照组比较下降最明显。依达拉奉组、脑蛋白水解物组分别在各时间点Y迷宫正确次数明显增加,与缺血组比较差异具有显著性意义,P(0.01,依达拉奉组Y迷宫正确次数较脑蛋白水解物组明显增加,差异具有显著性意义,P(0.01。2、组织病理学改变：对照组大鼠皮质、海马区神经细胞形态及分布正常。缺血组大鼠缺血4周,2只大鼠尾状核、额叶皮质和胼胝体区出现梗塞灶。额叶皮质和海马区神经细胞变性、坏死、脱失、胶质细胞增生。缺血8周以后未见明显梗塞灶,皮质及海马区可见变性坏死的神经细胞逐渐减少,但细胞脱失逐渐加重,脑室扩张,皮质萎缩变薄。依达拉奉组及脑蛋白水解物组大鼠额叶皮质及海马区神经细胞变性、坏死、脱失及胶质细胞增生均较缺血组减轻。3、额叶皮质与海马区自由基(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)与转化生长因子β(TGF-β1).Bcl-2抑凋亡因子的表达：对照组额叶皮质与海马区均有微弱TGF-β1,表达,说明内源性TGF-β1表达水平很低。TGF-β1表达在慢性脑缺血损伤中呈现一动态变化过程,且不同部位的表达存在差异。慢性脑缺血后,TGF-β1的表达主要集中在皮质及海马内,表达细胞是胶质细胞与锥体细胞,还有极少数巨噬细胞。慢性脑缺血4周之内达高峰,以后随着缺血时间的延长逐渐下降。缺血组缺血12周时在额叶皮质区TGF-β1表达高于对照组,P(0.05；缺血组缺血8周时在海马区TGF-β1表达高于对照组,P(0.05。依达拉奉及脑蛋白水解物组TGF-β1表达分别与对照组、缺血组各时间点比较在额叶皮质及海马区表达明显增高,且具有统计学意义,P<0.01。在各时间点各区,依达拉奉组TGF-p,表达高于脑蛋白水解物组,差异有显著性,P(0.O1(缺血4、8周),P<0.05(缺血12、16周)。对照组额叶皮质及海马区有少量Bcl-2阳性细胞表达。缺血组与用药组Bcl-2高峰表达均在缺血4周内,以后逐渐下降,到12周时缺血组与对照组相比额叶皮质Bcl-2表达仍高于对照组,差异显著,P(0.05。缺血4周时海马区Bcl-2表达明显高于对照组P<0.01,缺血4周后Bcl-2表达下降,缺血8周时海马区与对照组比较Bcl-2表达无显著差异,乃0.05。脑蛋白水解物与依达拉奉组,分别与对照组、缺血组各时间点比较额叶皮质及海马区Bcl-2表达均明显增高,差异有显著性,P<0.01。依达拉奉组额叶皮质及海马区Bcl-2表达在各时间点均高于脑蛋白水解物组,差异有显著性,P<0.01(缺血4、8周),P(0.05(缺血12、16周)。对照组额叶皮质与海马区均有少量MDA表达。缺血组及药物组缺血4周MDA表达均明显增高,呈一高峰状态,以后逐渐下降。各组缺血12周时表达基本恢复正常,各组差异无统计学意义。缺血组缺血8周时额叶皮质及海马区MDA的表达仍明显高于对照组,有显著差异,P<0.01,而依达拉奉组和脑蛋白水解物组8周时额叶皮质及海马区MDA的表达也高于对照组,P<0.05。依达拉奉组和脑蛋白水解物组8周时额叶皮质及海马区MDA的表达明显低于缺血组,有显著差异,P<0.01。依达拉奉组额叶皮质与海马区MDA表达明显低于脑蛋白水解物组,差异有显著性P(0.01(缺血4周),P(0.05(缺血8周)。对照组额叶皮质与海马区SOD表达呈阳性。缺血组和药物组缺血4周SOD表达明显减少,呈一低峰,以后逐渐增加。各组缺血16周时SOD表达基本恢复正常,与对照组相比无明显降低,统计学无意义。缺血组缺血12周额叶皮质及海马区SOD表达仍明显低于对照组,有显著差异,P<0.01。依达拉奉组缺血8周额叶皮质及海马区SOD表达低于对照组,P<0.01。脑蛋白水解物组缺血12周额叶皮质及海马区SOD表达仍低于对照组,P(0.05。依达拉奉组和脑蛋白水解物组与缺血组比较,缺血12周时各区SOD表达均高于缺血组,差异显著,P(0.01。依达拉奉组缺血8周、12周时额叶皮质及海马区SOD表达均高于脑蛋白水解物组,差异有显著性,P(0.01(缺血8周),P<0.05(缺血12周)。结论：1、双侧颈总动脉永久结扎的慢性脑缺血鼠随缺血时间延长出现认知功能进行性减退。2、双侧颈总动脉永久结扎可引起实验大鼠额叶皮质锥体细胞进行性脱失伴胶质细胞增生,海马区锥体细胞严重脱失伴基质疏松、微空泡形成。3、双侧颈总动脉永久结扎的慢性脑缺血鼠SOD值明显降低,MDA值明显增加,TGF-β1、Bcl-2值明显增加。四种因子不仅参与慢性脑缺血大鼠细胞凋亡,在迟发性神经元坏死损伤中也起一定的作用。其中通过促进Bcl-2的表达而抑制神经元的凋亡是细胞因子发挥抗脑缺血作用的重要途径。4、依达拉奉及脑蛋白水解物均有改善慢性脑缺血大鼠的认知功能,并能有效清除自由基,减缓SOD值的丧失,促进额叶及海马区的TGF-β1、Bcl-2表达,且依达拉奉治疗效果优于脑蛋白水解物。

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中文摘要  3-6
ABSTRACT  6-11
符号说明  11-12
前言  12-17
材料与方法  17-23
结果  23-31
讨论  31-47
结论  47-48
附图  48-56
参考文献  56-62
综述  62-74
  参考文献  69-74
致谢  74-75
发表论文情况  75-76

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