学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

玉米对生基因的SCAR分子标记及其标记片段序列分析研究

作　者: 谢传晓
导　师: 程备久；朱苏文
学　校: 安徽农业大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 玉米对生显性基因（Opp1，Opp2） RAPD（随机扩增多态性DNA，Random Amplification Polymorphic DNA） SCAR（特征性序列扩增区域，SequenceCharacterized Amplified Region） 同源性分析
分类号: S513
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
下　载: 131次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


本研究通过构建适合的玉米对生性状显性基因近等基因系及其后代群体，用RAPD方法在近等基因系混合池间进行了RAPD标记筛选工作，对稳定的RAPD标记在F2群体中进行了扩增与连锁分析，把紧密连锁的RAPD多态性标记进行了SCAR标记转化，成功地获得了与两个玉米对生显性基因连锁的SCAR标记，并对克隆的SCAR片段进行了相关序列分析，结果表明：1、构建的H14D对生系与H53互生系间，在对生性状表现上存在两对显性基因差 异，且两基因独立并具有互补作用；2、利用167个十碱基随机引物，筛选H14D与H53近等基因系建立的对生池与互 生池，共获得S312、S218、S360等11个稳定的多态性引物；3、通过11个多态性引物在F2群体的251个单株分别进行RAPD扩增及连锁分析， 结果显示：RAPDS312、RAPDS218与对生显性基因Opp1紧密连锁，其连锁 图距分别为3.0cM和5.2cM；S360与对生显性基因Opp2紧密连锁，其连锁图 距为5.2cM。4、11个标记之间的连锁关系分析表明：RAPDS312与RAPDS218两标记本身也 存在连锁，两标记的连锁图距为8.7cM，位于同一连锁群上对生显性基因Opp1 的两侧；RAPDS360与RAPDS312和RAPDS218位于不同连锁群。这三个 标记分别与玉米对生性状两个不同的显性基因连锁，其中用RAPDS312与 RAPDS218定位区域能包含对生显性基因Opp1。5、成功地将RAPDS312、RAPDS360分别转化成SCAR标记CBJ312和CBJ360， 并对对生玉米亲本池、互生池、F2单株进行了SCAR标记检测，在对生池和F2 的RAPDS312阳性单株中CBJ312的阳性率为100％，F2的RAPDS312阴性单 株没有检测到CBJ312扩增；在对生池和F2的RAPDS360阳性单株中CBJ360 的阳性率为100％，F2的RAPD S360阴性单株没有检测到CBJ312扩增。6、通过Database搜寻，发现CBJ312序列与大鼠微管结合蛋白tau蛋白的mRNA 及氨基酸序列同源性非常高，其第126至375号碱基之间的序列核苷酸序列与 tau蛋白序列同源性达92％，相应序列的可能氨基酸序列同源性达99％。最长可 能ORF也位于上述区域。CBJ360与水稻、人、果蝇等多种生物基因组的已知序 列具有很高的同源性，其中CBJ360序列的第11号至第588号共578个碱基与水 稻第一条染色体上的PAC克隆（AP002873）中第61至第638号578个碱基序列 同源性达100％。这些信息的获得有助于进一步了解这两个克隆片段的功能。 综上所述，本研究在对生玉米显性基因的分子标记上取得了重要的进展，筛选获得了与两对显性基因紧密连锁的RAPD标记，并在国内首次成功地把玉米的IUpD标记转化成 SCAR标记，分别获得了对gf：ll’T’两对显性基因 Oppl、仲p丁的沈AR标记CBJ3 12与CBJ360。这些研究成果将为对生玉米的分子标记辅助选择。对生基因的定位及图位克隆奠定了良好的基础。

全文目录


中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
引言  7-23
材料与方法  23-30
结果与分析  30-56
  1． 对生显性基因RAPDs标记的筛选  30-37
    1．1 对、互生近等基因系和遗传群体的构建与分析  30
    1．2 对、互生近等基因系DNA池间RAPD引物筛选  30-37
      1．2．1 基因组提取  30-31
      1．2．2 基因组中RNA对RAPD的影响  31-32
      1．2．3 对、互生近等基因系DNA池间RAPD引物筛选  32-37
  2． 多态性标记F_2代连锁分析  37-42
    2．1 多态性引物以F_2群体为模板的扩增结果  37-40
    2．2 分子标记与对生显性基因及分子标记间的连锁分析  40-42
  3． SCAR标记的转化  42-49
    3．1 连锁RAPDs条带的纯化  42
    3．2 连锁RAPDs片段的连接与转化  42-44
      3．2．1 连锁RAPDs片段的连接反应  42-43
      3．2．2 重组子外源片段的酶切验证  43-44
    3．3 SCAR标记的检测与分析  44-49
      3．3．1 SCAR CBJ312与CBJ360引物设计结果及其评估  44-47
      3．3．2 SCAR标记的PCR扩增  47-49
        3．3．2．1 CBJ312的PCR扩增与验证  47-48
        3．3．2．2 CBJ360的PCR扩增与验证  48-49
  4． SCAR片段的测序及序列分析  49-56
    4．1 CBJ312的测序结果及其序列分析  49-53
    4．2 CBJ360的测序结果及其序列分析  53-56
讨论  56-61
结论  61-62
参考文献  62-70
附图及附表  70-80
致谢  80-81
作者简介  81

相似论文

  1. 凡纳滨对虾虾头内源性蛋白酶分离纯化与酶学特性研究,S985.21
  2. 猪垂体转录因子（POU1F1）基因部分序列变异分析及其与生长性能的相关性研究,S828
  3. 小白菜耐盐性的遗传分析与耐盐相关基因的差异表达研究,S634
  4. 水稻抗瘟基因部分序列的克隆及同源性分析,Q943.2
  5. 黄单胞菌α-淀粉酶基因的克隆、测序及其进化研究,Q933
  6. 鸡含锰超氧化物歧化酶cDNA克隆与全序列分析,Q785
  7. 猪myostatin cDNA的克隆和序列分析的研究,S828.3
  8. 安徽省部分猪场猪繁殖与呼吸综合征的调查和研究,S858.28
  9. 福建省猪圆环病毒2型分子流行病学调查,S858.28
  10. 沪杭地区番茄上黄瓜花叶病毒基因多态性的研究,S436.412.1
  11. 湖光岩玛珥湖浮游细菌与古菌多样性的研究,Q938.8
  12. 金黄色葡萄球菌致病因子的检测及同源性分析,R446.5
  13. 侵染花生的辣椒褪绿病毒生物学性质及病毒基因组S RNA全序列研究,S435.652
  14. 牛传染性鼻气管炎重组疫苗的基础研究,S859.797
  15. 降胆固醇益生乳杆菌的筛选及其降胆固醇作用的研究,TS252.1
  16. 中国华东地区基因Ⅳ型戊型肝炎病毒人畜共患与进化起源研究,R512.6
  17. 水牛α-乳清蛋白全基因序列的克隆与分析,Q78
  18. 甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育恢复基因的精细定位,S565.4
  19. 家蚕肠液AKP的遗传分析及野桑蚕AKP基因的克隆研究,S881
  20. 玉帘凝集素的分离纯化、部分性质研究及分子克隆,Q51

中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 禾谷类作物 > 玉米（玉蜀黍）
© 2012 www.xueweilunwen.com