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舟山沿海有抑菌活性海洋微生物的筛选、鉴定及发酵条件等研究

作　者: 李鹏
导　师: 裘娟萍
学　校: 浙江工业大学
专　业: 生物化工
关键词: 海洋微生物海洋细菌海洋放线菌抑菌作用分离纯化 16S rDNA
分类号: TQ460.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

自从Flemming发现青霉素以来,相继己有350多种抗生素应用于临床,使多传染性疾病得到了控制,但随着抗生素的广泛使用和细菌耐药性的出现,寻找新的抗生素成为当务之急。海洋微生物由于其生存环境的特殊性(如高渗、高盐、低温、高压、低氧等),发展出独特的代谢方式,并使其成为海洋生物活性物质的重要来源,也使其成为新抗生素的重要来源,这类物质通常具备陆地微生物所没有的新的独特结构,在抗病菌、抗肿瘤、抗病毒等方面具有良好表现。从舟山沿海海域采集海水、海泥、海绵、海带及几种鱼类肠道,分离纯化共得到196株海洋细菌、34株海洋放线菌、22株海洋真菌,采用双层琼脂扩散法和纸片法对目标菌株进行抑菌试验,筛选到具有较好抑菌作用的海洋细菌NF19、海洋放线菌a1、X6、X7、B2、B5。16S rDNA分子序列分析和生理生化鉴定结果显示,菌株NF19为乳杆菌属的唾液乳杆菌(L.salivarius),a1、X6为链霉菌属的浅玫瑰色链霉菌(Streptomyces roseus),B2、B5均为链霉菌属(Streptomyces sp.),X7为链霉菌属的玫瑰暗黃链霉菌(Streptomyces roseofulvus)。对目标菌株进行发酵条件优化的研究,结果显示,将转速控制在120r/m时,摇瓶装量为50mL/250mL时候,菌株NF19的最适培养条件为:初始温度25℃、培养时间48h、初始pH为7.2、接种量为8%。菌株a1、X6、X7、B2、B5的最适培养条件为:初始温度25℃、培养时间96h、初始pH为7.0、接种量为2%,耐盐性分析结果表明X6菌株在NaCl浓度为5%具有最好的抑菌效果,其余菌株均在NaCl浓度为3%的抑菌效果最好。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
第一章绪论  9-24
  1.1 海洋微生物产活性物质的研究现状及进展  9-14
    1.1.1 抗肿瘤活性物质  9-10
    1.1.2 抗生素  10-12
    1.1.3 酶及酶抑制剂  12-13
    1.1.4 海洋生物毒素  13
    1.1.5 不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid,PUFA)  13-14
    1.1.6 多糖  14
    1.1.7 其他活性物质  14
  1.2 海洋微生物的分类及研究现状  14-17
    1.2.1 海洋细菌  14-15
    1.2.2 海洋放线菌  15-16
    1.2.3 海洋蓝细菌  16
    1.2.4 海洋古菌  16
    1.2.5 海洋原绿藻  16
    1.2.6 海洋真核微藻  16
    1.2.7 海洋真菌  16-17
  1.3 16S rRNA/rDNA 序列分析方法在海洋细菌分类鉴定中的应用  17-18
    1.3.1 DNA 的提取与纯化  17
    1.3.2 PCR 技术  17-18
    1.3.3 琼脂糖凝胶电泳  18
    1.3.4 PCR 产物克隆技术  18
    1.3.5 DNA 测序及微生物分类鉴定  18
  1.4 选题目的目的和意义  18-20
  参考文献  20-24
第二章目的菌株的分离、纯化、筛选  24-35
  2.1 前言  24
  2.2 菌株的分离纯化及筛选  24-33
    2.2.1 材料与方法  24-27
    2.2.2 结果与讨论  27-33
  2.3 结论  33-34
  参考文献  34-35
第三章具有抗菌活性的菌株鉴定  35-69
  3.1 前言  35
  3.2 菌株的鉴定  35-67
    3.2.1 材料和方法  35-41
    3.2.2 结果与讨论  41-67
  3.3 结论  67-68
  参考文献  68-69
第四章菌株的发酵条件优化  69-78
  4.1 前言  69
  4.2 发酵条件研究  69-76
    4.2.1 材料与方法  69-71
    4.2.2 结果与讨论  71-76
  4.3 结论  76-77
  参考文献  77-78
致谢  78-79
攻读学位期间发表的学术论文  79

舟山沿海有抑菌活性海洋微生物的筛选、鉴定及发酵条件等研究

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