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人参皂苷对小鼠骨髓MSC体外增殖及成骨分化的影响

作　者: 吴晶晶
导　师: 汪保和
学　校: 湖南师范大学
专　业: 动物学
关键词: 人参皂苷间充质干细胞增殖成骨分化小鼠
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

研究背景：间充质干细胞(MSC)的增殖和成骨分化能力减低可能是骨质疏松症等疾病发病机制的重要环节,已有研究表明人参皂苷对这些疾病具有防治效果。最近有作者报告,人参皂苷能促进大鼠骨髓MSC的体外增殖,对MSC成骨分化的影响尚未见报道。目的：本工作旨在研究人参皂苷对骨髓MSC增殖和成骨分化的影响,揭示其作用机制,以深入认识人参皂苷对MSC的药理作用,并为人参皂苷用于骨质疏松症等疾病的防治提供实验证据。方法：进行小鼠骨髓MSC集落形成实验、传代培养和成骨诱导培养,分组在培养体系中加入不同剂量的人参总皂苷(终浓度为25～100mg／L)。测定MSC集落形成率、.计数传代扩增细胞和进行MTT比色试验。在成骨诱导培养后,进行钙结节茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)活性检测；而且应用实时荧光定量PCR检测ALP和BMP-2的mRNA表达水平。结果：在人参总皂苷为100mg／L的体外培养体系中,MSC集落产率显著增高,MSC传代扩增细胞数明显高于对照组,而在25～50mg／L范围内,MSC集落产率和传代扩增细胞数的变化无显著性意义。MSC传代扩增细胞受100mg／L人参总皂苷作用24h后,MTT试验吸光值(A490值)显著高于对照组；而在50mg／L和100mg／L人参皂苷作用48h后,A490值均明显高于对照组。茜素红染色后的钙结节计数结果显示,成骨诱导液+100mg／L人参皂苷组与成骨诱导液对照组相比,钙结节数量有明显增多(P<0.05)；其余实验组与成骨诱导液组相比差异无显著性意义(P>0.05)。与成骨诱导液对照组相比,在MSC传代扩增细胞成骨诱导后的第14d、21d,成骨诱导液+100mg／L人参皂苷组的ALP活性显著增高,而在诱导后第7d, ALP活性的差异没有显著性。25mg／L和50mg／L人参总皂苷对MSC传代扩增细胞的ALP活性无明显影响。在诱导培养体系中,与Omg/LGS相比,当GS为100mg／L时,成骨细胞的ALP mRNA表达水平明显上升；而GS为50mg/L、100mg/L时,BMP-2 mRNA呈高表达。与成骨诱导液对照组相比,成骨诱导液+100mgm人参总皂苷组的ALP和BMP-2 mRNA表达水平均显著增高；+50mg／L人参皂苷组的ALPmRNA表达水平也显著增高,而BMP-2 mRNA的表达水平无明显差异；+25mg／L人参总皂苷组的ALP和BMP-2 mRNA表达水平均无明显差异。结论：人参总皂苷能促进体外原代培养的小鼠骨髓MSCs及其传代扩增细胞的增殖。对小鼠骨髓MSCs传代扩增细胞,人参总皂苷有助于成骨诱导分化,并上调ALP和BMP-2 mRNA的表达水平。这些作用均具有剂量依赖性和时间依赖性。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-8
主要缩略词  8-10
第一部分:研究背景综述  10-25
  1.1 人参皂苷的主要生物活性  10-17
  1.2 骨髓间充质干细胞的增殖和分化  17-22
  1.3 本研究的选题背景、目的和意义  22-25
第二部分:实验研究  25-50
  2.1 材料与方法  25-32
  2.2 结果  32-42
  2.3 讨论  42-49
  2.4 小结  49-50
参考文献  50-62
攻读学位期间科研成果  62-63
致谢  63-64

人参皂苷对小鼠骨髓MSC体外增殖及成骨分化的影响

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