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COPD肌萎缩患者股外侧肌PPARa mRNA表达及血清TNFa、IL-8、hsCRP水平研究

作　者: 何大川
导　师: 戴路明；方利洲；傅炜萍
学　校: 昆明医学院
专　业: 呼吸内科学
关键词: COPD 肌萎缩股外侧肌 PPARa mRNA 实时荧光定量 RT-PCR ELISA TNFa IL-8 hsCRP
分类号: R563.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的研究过氧化酶体增殖物激活受体a (peroxisome proliferator-activated receptor a, PPARa) mRNA在稳定期的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者股外侧肌中的表达及血清TNFa、IL-8、hsCRP水平,探讨COPD肌萎缩发病机制。方法将30例入选者分为健康组(10例)、COPD骨骼肌萎缩组(10例)、COPD骨骼肌非萎缩组(10例),首先进行肺功能、身体组成、血气分析等检查。再采用ELISA法检测血清中IL-8、TNFa水平,我院生化实验室检测hsCRP水平。最后以针吸活检方法取所有入选者股外侧肌50mg作为标本,通过对实验条件的探讨,建立了实时荧光定量 RT-PCR检测方法,检测股外侧肌PPARa mRNA相对表达量。结果1. COPD骨骼肌萎缩患者临床特点：COPD骨骼肌萎缩组较COPD骨骼肌非萎缩组患COPD时间长p<0.01)。COPD骨骼肌萎缩组较COPD骨骼肌非萎缩组和健康组体质量、体质量指数、去脂肪质量、去脂肪指数下降(均p＜0.01);COPD骨骼肌萎缩组较健康组脂肪质量、脂肪指数下降(均p<0.01)；COPD骨骼肌非萎缩组较健康组体质量指数下降(p<0.05)。三组肺功能FEV1%PRE、FEV1/FVC%、FVC%PRE两两比较均有差异(均p<0.01),COPD骨骼肌萎缩组较COPD骨骼肌非萎缩组和健康组以上三项均低；COPD骨骼肌非萎缩组较健康组以上三项均低。COPD骨骼肌萎缩组和COPD骨骼肌非萎缩组PO2低与健康组(均p<0.01)。2.血清炎症因子水平：血清CRP三组无差异,三组血清IL-8、TNFa两两比较差异有统计学意义(均p<0.01),COPD骨骼肌萎缩组较COPD骨骼肌非萎缩组和健康组血清IL-8、TNFa均升高,COPD骨骼肌非萎缩组较健康组血清IL-8、TNFa均升高。3.实时荧光定量RT-PCR条件探讨：通过对实验条件的探讨,确定PPARa mRNA和GAPDH实时荧光定量RT-PCR反应体系均为cDNA 3.0μl, TaqDNA聚合酶0.1U/μl,1.0 ul,上下游引物各1.0μl,实时荧光定量试剂(One-step RT-PCR Kit)25μl,总体积50μl。扩增条件：94°C预变性5 min,94°C变性45s,63℃复性45s,72°C延伸45s,33个循环,72℃加时延伸5min。4. PPARa mRNA表达：股外侧肌PPARa mRNA表达量分别为：健康组0.82±0.15；COPD骨骼肌萎缩组0.44±0.12；COPD骨骼肌非萎缩组0.69±0.14,所有COPD0.56±0.18。COPD骨骼肌萎缩组股外侧肌PPARa mRNA表达量与健康组及COPD骨骼肌非萎缩组比较差异有统计学意义(均p<0.01),COPD骨骼肌萎缩组股外侧肌PPARa mRNA表达下降；COPD骨骼肌非萎缩组与健康组股外侧肌PPARa mRNA表达量比较差异无统计学意义p>0.05),但较健康组表达呈下降趋势；所有COPD股外侧肌PPARa mRNA表达量与健康组比较差异有统计学意义(p＜0.01),所有COPD股外侧肌PPARa mRNA表达量下降。5.相关关系：股外侧肌PPARa mRNA表达与FFMI及BMI正相关(r=0.586、r=0.626；p<0.01)；与FEV1% PRE及FEV1% FVC正相关(r=0.574、r=0.613：p<0.01)；与TNFa及IL-8负相关(r=-0.618、r=-0.690；p<0.01)。结论本研究显示COPD合并骨骼肌萎缩的患者具有患COPD年限较长、身体组成发生改变、肺功能下降及慢性低氧血症等临床特点。股外侧肌PPARa mRNA在所有COPD及COPD合并骨骼肌萎缩的患者中表达下降,在COPD骨骼肌非萎缩患者中表达呈下降趋势。血清TNFa、IL-8在COPD骨骼肌萎缩及非萎缩患者中升高。PPARa mRNA表达与FFMI及BMI正相关；与TNFa及IL-8负相关；与FEV1% PRE及FEV1% FVC正相关。综上表明PPARa mRNA表达下调参与了COPD慢性全身炎症反应,不仅累及肺使得肺功能的进一步下降,也可累及骨骼肌导致骨骼肌萎缩的发生,在COPD骨骼肌萎缩中起了重要的作用。

全文目录

中文摘要  7-9
Abstract  9-14
前言  14-16
一、研究对象及实验材料  16-18
  1 研究对象  16
    1.1 对象的纳入  16
    1.2 排除标准  16
    1.3 终止标准  16
  2 实验材料  16-18
    2.1 主要试剂  16-17
    2.2 主要仪器  17
    2.3 SPSS 11.5 for windows软件包  17-18
二、实验方法及步骤  18-25
  1. 肺功能测定及血气分析检查  18
    1.1 肺功能测定  18
    1.2 血气分析  18
  2. 身体组成测定  18-19
    2.1 一般项目  18
    2.2 身体组成  18-19
  3 血清TNFa、IL-8、hsCRP水平检测  19-21
    3.1 IL-8检测的操作步骤  19-20
    3.2 TNF-α检测的操作步骤  20
    3.3 结果判定  20-21
    3.4 血清hsCRP水平  21
  4 骨骼肌标本采集及肌组织PPARa mRNA表达定量检测  21-24
    4.1 股外侧肌标本采集保存  21
    4.2 总RNA的提取及cDNA的合成  21-22
    4.3 PPARa mRNA RT-PCR引物设计  22
    4.4 PPARa mRNA RT-PCR实验条件的探讨  22-23
    4.5 实时荧光定量RT-PCR产物的凝胶电泳、测序及定量  23-24
  5. 统计学分析  24-25
三、结果与分析  25-37
  1. 研究对象  25-26
  2. 血清炎症因子水平  26-27
  3. 抽提的股外侧肌总RNA和合成cDNA浓度和纯度  27-28
  4. RT-PCR  28-34
    4.1. 建立的PPARa mRNA RT-PCR反应条件  28-29
    4.2 RT-PCR产物分析  29-33
    4.3 RT-PCR检测PPARa mRNA表达水平  33-34
  5. 相关关系  34-37
    5.1 PPARa mRNA表达与身体组成相关关系  34-35
    5.2 PPARa mRNA表达与肺功能相关关系  35
    5.3 PPARa mRNA表达与炎症因子相关关系  35-37
四、讨论  37-45
  (一)、COPD骨骼肌萎缩的临床特点  37-39
  (二)、全身炎症反应与COPD骨骼肌萎缩  39-40
  (三)、COPD骨骼肌萎缩股外侧肌PPARa mRNA表达  40-44
    1)COPD骨骼肌萎缩研究现状  40
    2)PPARs与COPD骨骼肌萎缩的研究  40-41
    3)股外侧肌PPARa mRNA在COPD骨骼肌萎缩表达研究  41-42
    4)股外侧肌PPARa mRNA与身体组成、肺功能和炎症因子相关研究  42
    5)PPARa mRNA在COPD骨骼肌萎缩的作用探讨  42-44
  (四)、本研究局限性及展望  44-45
五、结论  45-46
参考文献  46-50
附录说明  50-53
文献综述  53-62
硕士期间发表文章  62-63
致谢  63

COPD肌萎缩患者股外侧肌PPARa mRNA表达及血清TNFa、IL-8、hsCRP水平研究

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