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Wiskott-Aldrich综合征10例临床与分子特点分析

作　者: 肖慧勤
导　师: 赵晓东
学　校: 重庆医科大学
专　业: 儿科学
关键词: Wiskott-Aldrich综合征 WAS蛋白 WAS蛋白基因临床表型分子诊断
分类号: R725.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的探讨10例Wiskott-Aldrich综合症(Wiskott-Aldrich syndrome ,WAS)患儿的临床、免疫学和分子生物学特点。方法1.对2007-2009年在重庆医科大学附属儿童医院诊断的10例WAS患儿进行临床资料总结及临床表型评分。2.对患儿进行血常规、免疫球蛋白、淋巴细胞分类、淋巴细胞转换率、硝基蓝四氮唑还原试验(NBT)及骨髓常规检查。3.收集10例患儿及家庭成员新鲜全血标本。4.Ficoll-Hypaque密度梯度离心分离患儿及亲属外周血单个核细胞(PBMCs),送重庆医科大学电镜室行淋巴细胞扫描电镜(SEM)检查。5.应用流式细胞术(Flow cytometry ,FCM)检测10例患儿及父母PBMCs中WAS蛋白(Wiskott-Aldrich syndrome protein ,WASP)表达。6.提取患儿总RNA,RT-PCR逆转录合成cDNA,提取患儿及亲属基因组DNA,用于WASP基因的扩增。7. PCR扩增WASP cDNA,12个外显子及内含子交接区域。琼脂糖胶回收纯化PCR产物直接进行双向测序,将测序结果与GeneBank的WASP基因序列进行比对,经RT-PCR发现突变后进一步行DNA分析明确。结果1.本组均男性,多以自幼大便带血丝及皮肤瘀点瘀斑起病,均有血小板减少伴小血小板,湿疹和免疫缺陷表现,为典型WAS。2例发生自身免疫性溶血性贫血(AIHA),1例患视网膜母细胞瘤(RB),评5分。3例分别发生严重感染和湿疹评4分,4例评3分。2.具有阳性家族史患儿临床诊断年龄(9个月)明显早于无家族史者(12.9个月)。3.多数患儿IgA(8/9)、IgE(8/9)和IgG(7/9)升高,除6例CD4+T比例下降(6/9),其余患儿淋巴细胞亚群分类正常。1例淋巴细胞增殖功能降低(1/3),2例NBT下降(2/5)。4. 6例患儿行骨髓细胞学检查,其结果缺乏特征性改变。5. 5例患儿行SEM可见典型淋巴细胞微绒毛改变。6. 10例患儿PBMCs均无WASP表达。7. 9例行WASP基因突变分析共发现7种不同突变,3例为新型突变(*),8例位于编码区,1例位于内含子。4例突变位于EVH1区,2例BR区,1例VCA区,1例GBD区。突变类型包括无义突变4例(2例155 C>T, R 41 X; 2例665 C>T,R 211 X),错义突变2例(*168 C>A, T 45 K;1487 G>A ,D485N/5′剪切),缺失突变1例(*747-748 del T, I 238 Fs X260),拼接位点突变1例(Ivs9 +2 T>C),插入突变1例(*253 Ins A,C73X)。8例患儿母亲为突变携带者。8.除预防性抗生素及静注丙球(IVIG),3例接受造血干细胞移植(HSCT),移植后2例正常表达WASP,1例死于巨细胞病毒(CMV)所致的肺间质性病变。结论早发持续血小板减少伴血小板体积减小的男性患儿应怀疑WAS及相关疾病, WASP检测和基因分析是明确诊断的重要手段,基因分析还有利于发现携带者和进行遗传咨询。干细胞移植是目前根治WAS,尤其是重症患儿最有效的方法。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-13
论文正文：Wiskott-Aldrich 综合征10 例临床与分子特点分析  13-30
  前言  13-14
  1 对象和方法  14-19
    1.1 研究对象  14
    1.2 材料  14-15
    1.3 方法  15-19
  2 结果  19-27
    2.1 临床资料  19-23
    2.2 实验结果  23-27
  3 讨论  27-30
结论  30-31
参考文献  31-34
文献综述  34-50
  1. Wiskott-Aldrich 综合征发病机制研究进展  34-41
  2. Wiskott-Aldrich 综合征的临床研究进展  41-50
致谢  50-51
攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文  51

Wiskott-Aldrich综合征10例临床与分子特点分析

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