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中药诱导成纤维细胞凋亡及防治腹膜粘连研究

作　者: 谢艺
导　师: 崔华雷
学　校: 天津医科大学
专　业: 儿科学
关键词: 腹膜粘连成纤维细胞丹皮细胞增殖细胞凋亡
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的腹膜粘连多由创伤及炎症引发,经过一系列复杂过程,最终形成腹膜纤维性粘连导致术后严重并发症。通过对已形成的腹膜粘连组织进行多种病理组织染色后的病理形态观察,以明确腹膜纤维性粘连组织的构成及结构特点,旨在寻求防治腹膜粘连的作用位点；通过对腹膜粘连的动物模型中药丹皮持续给药,观察其作用后粘连组织病理形态的改变,以探讨其对腹膜粘连治疗中的防治意义；从而进一步研究中药丹皮对腹膜粘连成纤维细胞增殖及凋亡的影响,以探讨中药丹皮对腹膜粘连的作用机理,为临床防治腹膜粘连提供细胞学理论依据。方法收集2009年12月至2010年11月2例天津儿童医院确诊腹膜粘连性肠梗阻住院病人手术中取的粘连组织标本,进行HE染色、V-G染色及Masson三色染色三种病理组织染色,光镜下观察腹膜粘连组织的病理形态特点,分辨其间的成纤维细胞及胶原形态及结构；此后取健康Wistar大鼠60只,随机分为3组,每组20只。进行以下实验：A组：创伤+感染粘连组,钳夹肠壁后并于腹腔内注入大肠杆菌Ol1b4造模；B组：创伤+感染+中药组,在A组的基础上,术后12h丹皮4g灌胃。灌胃容量为4ml,每日1次；C组：正常组,开腹后未作其他处理即关腹,作为空白对照组。均于术后14d处死大鼠,观察腹膜粘连大体情况,并评定粘连分级,取粘连部位组织行HE染色。利用Ridit分析行粘连分级的统计学分析；进而对腹膜粘连成纤维细胞进行体外培养实验,采用倒置相差显微镜、细胞计数、流式细胞仪及试剂盒等方法进行观察、分析,以研究丹皮对腹膜粘连成纤维细胞生物学行为以及凋亡的影响。结果腹膜粘连组织中主要细胞为间皮细胞、成纤维细胞,大量以胶原为主的间质增生,其间可见少量炎症细胞等,并有小血管长入；间皮细胞位于粘连组织的外层,其内大量胶原无序排列,其间夹杂大量梭形成纤维细胞及纤维细胞。动物实验中大体粘连分级A组>B组>C组,HE染色发现给药组粘连程度明显轻于腹膜粘连模型组,其镜下表现粘连组织中成纤维细胞及胶原增生程度减轻；中药丹皮口服治疗,可以明确降低腹膜粘连程度和减少粘连带的形成,其机制可能与调控成纤维细胞的增殖和凋亡平衡相关；而体外培养的腹膜粘连成纤维细胞,加入丹皮后在倒置相差显微镜、细胞计数、流式细胞仪以及Annexin V FITC/PI测定下,与对照组比较,细胞表现为生长趋势及增殖活性被明显抑制,而对细胞凋亡有诱导作用。结论成纤维细胞及其分泌的胶原等细胞外基质是粘连组织的基础结构；丹皮对成纤维细胞的生长趋势及增殖活性有明显抑制作用,诱导成纤维细胞凋亡。提示中药丹皮是成纤维细胞负性调节因子,在腹膜粘连的防治中有一定的应用价值。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略语/符号说明  10-11
前言  11-14
  研究现状、成果  11-12
  研究目的、方法  12-14
一、腹膜粘连索带病理形态分析研究  14-25
  1 材料和方法  14-16
    1.1 材料  14
    1.2 实验试剂及仪器  14-15
    1.3 方法  15-16
  2 结果  16-22
  3 讨论  22-24
  4 小结  24-25
二、中药丹皮防治腹膜粘连的研究  25-30
  1 材料和方法  25-26
    1.1 模型实验动物及分组  25
    1.2 菌种制备及细菌记数  25-26
    1.3 中药试剂制备  26
    1.4 取材时间  26
    1.5 观测指标  26
  2 结果  26-27
  3 讨论  27-29
  4 小结  29-30
三、中药丹皮对粘连成纤维细胞增殖抑制及凋亡诱导作用的实验研究  30-44
  1 材料和方法  30-33
    1.1 材料  30
    1.2 实验试剂及仪器设备  30-31
    1.3 实验方法  31-33
    1.4 数据处理方法  33
  2 结果  33-36
  3 讨论  36-43
  4 小结  43-44
结论  44-45
参考文献  45-49
发表论文和参加科研情况说明  49-50
综述成纤维细胞在腹膜粘连中的研究进展  50-65
  综述参考文献  58-65
致谢  65

中药诱导成纤维细胞凋亡及防治腹膜粘连研究

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