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鼠尾草酸对四氯化碳诱导肝细胞损伤的作用研究

作　者: 刘振国
导　师: 万克青
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: 肝损伤 四氯化碳 鼠尾草酸 脂质过氧化 前炎症因子
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


研究目的：鼠尾草酸(CA)是一种天然、强效的抗氧化剂,具有多种药理和生物活性,但尚无对肝脏保护作用的研究。本研究通过分别建立CCl4诱导的大鼠肝损伤模型和正常人肝细胞损伤模型的基础上,系统地观察了CA对肝细胞的保护作用,并初步探讨了其机制是否与抑制脂质过氧化和炎症因子生成有关。研究方法：本研究分为二个部分：在体动物实验和体外细胞实验：(1)动物实验：按0.7 ml/100g体重剂量,SD大鼠1次性腹腔注射10%CCl4色拉油混悬液。实验分为6组：正常对照组,腹腔注射等体积生理盐水；CCl4肝损伤模型组：灌胃给予等体积双蒸水,连续4天,然后腹腔注射10%CCl4色拉油混悬液；CA处理组：在CCl4造模前大鼠每日分别灌胃给予不同剂量CA,剂量分别为25、50和100 mg/kg,连续4天；阳性对照药联苯双酯(BD,100 mg/kg),在CCl4造模前大鼠每日分别灌胃给予BD (100 mg/kg),剂量100mg/kg,连续4天。CCl4处理后24 h取血检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性以及白介素-6(IL-6)水平。实验结束后,处死动物后取其肝脏进行病理观察和检测肝组织匀浆MDA含量。(2)细胞实验：培养L-02人正常肝细胞株。实验设正常对照组,CCl4模型组(加入60%饱和浓度的CCl4 RPMI 1640培养液)；CA处理组,在CCl4造模前1 h加入不同剂量CA,浓度分别为5、10和25μg/ml；阳性对照药BD(25μg/ml)组,在CCl4造模前1h加入BD,浓度为25μg/ml。加入CCl4后继续培养6 h,MTT法测定细胞存活率,收集培养上清液检测ALT和AST活性以及IL-6水平,测定细胞中MDA含量。结果：(1)动物实验：正常SD大鼠血浆转氨酶ALT和AST活性分别为49.6±7.9和182.4±19.8 U/L。腹腔注射CCl4后,血中ALT和AST活性显著升高,24 h后分别达到1243.1±325.4和795.4±94.3 U/L。正常SD大鼠血浆IL-6水平和肝组织匀浆MDA分别为210.8±57.4 ng/ml和0.77±0.08 nmol/mg。腹腔注射CCl4后IL-6水平和MDA含量显著增加,分别达到392.5±71.3 ng/ml和2.46±0.73 nmol/mg。上述指标与正常对照组比较均具有显著性差异(P<0.01)。在CCl4造模前大鼠灌胃给予三个不同剂量的CA,能不同程度地减轻CCl4诱导的大鼠血浆ALT和AST活性升高、降低血浆IL-6水平和肝组织匀浆MDA含量(ALT分别为788.9±124.6,456.7±98.5,234.8±79.7 U/L；AST分别为525.5±112.5,351.3±76.9,276.5±69.4 U/L；IL-6分别为324.8±61.7,265.8±31.8,239.0±51.4ng/ml; MDA含量分别为1.63±0.5 1,0.98±0.75,0.85±0.62nmol/ml)。同时,病理组织学结果显示,在CCl4造模前大鼠每日分别灌胃给予三个不同剂量的CA,能不同程度地保护CCl4诱导的肝组织损伤。(2)细胞实验：CA(25μg/ml)和BD(25μg/ml)均对正常人肝细胞株L-02存活率无明显影响。加入CCl4培养6 h后,肝细胞存活率显著降低,达到78.5±4.3%,与正常对照组比较具有显著性差异(P<0.01)。在加入CCl4损伤前1 h分别加入三个浓度的CA能不同程度地减少CCl4诱导的肝细胞存活率降低(肝细胞存活率分别为84.9±4.1,90.1±3.2,97.4±6.8)。正常人肝细胞株L-02培养液ALT和AST活性分别为32.1±11.3和59.6±12.1 U/L,IL-6水平和MDA含量分别为412.5±61.4 ng/ml和4.10±1.80nmol/ml。加入CCl4培养6 h后,肝细胞培养液ALT和AST活性显著升高,分别达到186.8±25.1和141.2±27.8 U/L,同时IL-6水平和MDA含量显著增加,达到798.6±45.8 ng/ml和17.54±4.36nmol/ml。上述指标与正常对照组比较均具有显著性差异(P<0.01)。在加入CCl4损伤的同时分别给予三个浓度的CA能不同程度的减轻CCl4诱导的ALT和AST活性升高,IL-6水平和MDA含量增加(ALT分别为104.9±23.3,63.7±14.5,53.9±9.6 U/L；AST分别为125.3±20.4,85.5±14.2,64.9±11.4 U/L；IL-6水平分别为614.9±79.0,538.9±31.9,469.9±51.7 ng/ml；MDA含量分别为11.21±1.65,6.53±1.71,5.00±1.65 nmol/ml)。结论：细胞和动物实验结果均证实,鼠尾草酸对CCl4诱导肝细胞损伤具有保护作用,其具体机制与抑制脂质过氧化和前炎症因子IL-6生成有关。

全文目录


摘要  4-7
ABSTRACT  7-10
英文缩写对照及中英文对照  10-12
第一章 前言  12-14
第二章 材料与方法  14-22
  1 动物实验  14-18
    1.1 实验动物  14
    1.2 试剂和仪器  14-15
    1.3 药物的配制  15
    1.4 急性肝损伤大鼠模型的建立  15
    1.5 实验分组  15-16
    1.6 肝脏病理检测  16-17
    1.7 血浆ALT和AST活性检测  17
    1.8 血浆中IL-6含量测定  17
    1.9 肝组织匀浆MDA含量检测  17-18
  2 细胞实验  18-21
    2.1 细胞株  18
    2.2 试剂和仪器  18
    2.3 药物的配制  18-19
    2.4 细胞培养  19
    2.5 CCl_4损伤肝细胞的方法  19
    2.6 MTT法测定细胞存活率  19-20
    2.7 生化指标检测  20-21
  3 数据处理  21-22
第三章 结果  22-30
  3.1 动物实验  22-23
  3.2 细胞实验  23-30
第四章 讨论  30-33
第五章 结论  33-34
参考文献  34-37
综述  37-47
  参考文献  42-47
致谢  47

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