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罂粟碱在兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛中的作用

作 者: 郭德伟
导 师: 马建荣
学 校: 中南大学
专 业: 神经外科学
关键词: 蛛网膜下腔出血 基底动脉 Bcl-2 bax 脑血管痉挛 罂粟碱
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 22次
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内容摘要


目的:研究罂粟碱在兔蛛网膜下腔出血脑血管痉挛中的作用。材料与方法:采用单侧颈总动脉结扎后枕大池二次注血法制备兔蛛网膜下腔出血模型,选用健康成年新西兰兔72只随机分成A、B、C、D 4组,根据设计时间点不同每组分24h、72h、7天3个亚组,每个亚组6只。A组为假手术对照组,分别以A1、A2、A3代表假手术后饲养24h、72h、7天三个亚组;B组为SAH对照组,分别以B1、B2、B3代表SAH模型制作成功后饲养24h、72h、7天三个亚组;C组为SAH+PPA组,分别以C1、C2、C3代表SAH+PPA干预后饲养24h、72h、7天三个亚组;D组为SAH+PPA明胶海绵组,分别以D1、D2、D3代表SAH+PPA明胶海绵干预后饲养24h、72h、7天三个亚组,各组在其对应的饲养时间点断头取脑,于视交叉后1.4cm、2.0cm处取冠状面切片行HE染色、Bcl-2免疫组化染色及bax免疫组化染色,分别观察兔海马CA1区存活神经元密度及Bcl-2、bax的表达。本实验数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析。结果:光镜下观察H-E染色切片,可以见到A组基底动脉血管管壁平滑,结构完整,未见增厚,B组血管管径狭窄,血管内皮细胞肿胀明显,内弹力板皱折,部分内皮细胞脱落,平滑肌细胞变性,C、D组血管管径轻度狭窄,内皮细胞肿胀轻微。光镜下对HE染色切片中海马CA1区神经元密度进行计数, A组见散在神经元凋亡;B组可见大量海马锥体细胞凋亡;同时间点上,C、D组切片中海马CA1区神经元细胞凋亡数目较B组少。各组免疫组化染色切片观察结果示:Bcl-2和bax染色阳性细胞表现为胞质被染成棕黄色,并且均匀弥漫染色。(1)Bcl-2免疫组化染色阳性神经元细胞观察结果:在A组海马CA1区Bcl-2染色较浅,而在B、C、D组中,海马CA1区的Bcl-2染色明显,且相较于B组,C、D组阳性细胞数更多且染色更深。(2)bax免疫组化染色阳性神经元细胞观察结果:在A海马CA1区bax染色较浅,而在B、C、D组中,海马CA1区bax染色明显。B组与C、D两组相比,阳性细胞数更多且染色更深。统计学处理分析结果显示各组之间存活神经元密度、Bcl-2及bax表达强度进行两两对比存在显著性差异。结论:1.SAH能够使海马CA1区神经元细胞中Bcl-2、bax的表达升高。2.罂粟碱(PPV)对SAH后CVS有舒张血管作用,可升高海马CA1区神经元细胞中的Bcl-2的表达,降低bax的表达,发挥抗凋亡作用。3.罂粟碱(PPV)的缓释制剂在SAH后CVS的扩血管作用显著,但明胶海绵仍不是理想的缓释载体。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
缩略词  11-12
第一章 前言  12-14
第二章 材料与方法  14-22
  2.1 试剂及仪器  14-15
  2.2 实验步骤  15
  2.3 实验分组及动物模型制备  15-16
  2.4 罂粟碱及其它药物用法  16-17
  2.5 脑组织的获取及切片制作  17
  2.6 HE染色步骤  17-18
  2.7 免疫组化操作步骤  18-19
  2.8 标本大体观察  19
  2.9 HE切片观察  19
  2.10 免疫组化结果观察  19
  2.11 试验对象及标本的筛选  19
  2.12 家兔的饲养环境及进食、神经功能观察评分  19-20
  2.13 统计学处理  20-22
第三章 结果  22-36
  3.1 脑基底池大体观察  22
  3.2 HE染色结果  22-25
  3.3 免疫组化染色观察结果  25-31
  3.4 家兔进食及神经功能观察  31-33
  3.5 实验结果分析  33-36
第四章 讨论  36-45
  4.1 动物模型的制作  36-37
  4.2 实验动物的筛选  37
  4.3 蛛网膜下腔出血脑血管痉挛  37-40
  4.4 蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛动物模型中海马CA1区Bcl-2bax蛋白的表达及与神经元凋亡的关系  40-42
  4.5 罂粟碱(PPA)对SAH后CVS神经元凋亡的影响  42-44
  4.6 罂粟碱(PPA)对SAH后CVS Bcl-2、bax蛋白表达的影响  44-45
第五章 结论  45-46
参考文献  46-52
综述  52-65
  参考文献  58-65
附图  65-69
致谢  69

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