学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

大鼠毛囊干细胞的分离培养和鉴定方法研究

作　者: 王祝迁
导　师: 王玉杰
学　校: 新疆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 毛囊干细胞分离培养鉴定
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 46次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：众所周知,干细胞是指未成熟细胞,具有自我更新和分化能力,可分化为胚胎干细胞和成体干细胞、其他细胞、组织和器官。毛囊的周期性生长提示毛囊存存在着一群具有强增殖能力的细胞称之为毛囊干细胞。毛囊干细胞来源广泛且取材较容易；细胞在体外显示出很强的生长能力和集落形成能力,单个细胞可分裂增殖至1.7×1038个；不涉及伦理和道德问题的限制；能分化成表皮、皮脂腺和毛囊以及神经元、脂肪细胞和成骨细胞；因而成为组织工工工程理想的种子细胞。目前,毛囊干细胞的筛选纯化主要有两类方法：差速贴壁法和免疫磁珠法。其中,免疫磁珠法花费昂贵,操作复杂,筛选过程中可能会导致细胞活性受损,国内仅有少数有条件的科研单位能够完成,因而并非理想的筛选纯化方法。我们通过查阅国内外文献,利用我校现有的实验设备和技术平台,通过反复试验探索,联合使用显微分离技术、二步酶法以及差速贴壁法,亦可获得足量高纯度、活性好的毛囊干细胞。方法：经伦理学审查同意后,在实验过程中,选用清洁级SD大鼠的8-9天乳鼠作为研究动物。经过严格消毒大鼠乳鼠触须部组织后,手术取下含有毛囊的触须部组织。然后在超净台中,体式显微镜下,分离出大鼠触须部的毛囊组织,切取毛囊外根鞘部位；再分别使用中性蛋白酶和胰酶在自动摇床中消化；利用Ⅳ型胶原包被的培养瓶(即差速贴壁法)筛选出贴壁较快的细胞用10%胎牛血清的角朊细胞无血清培养基进行培养。所获细胞进行传代、消化以及冻存等技术处理。通过倒置显微镜定期观察照相、电子显微镜照相、姬姆萨染色、免疫荧光染色、绘制生长曲线以及流式细胞术检测等进行鉴定。结果：筛选后的细胞在倒置相差显微镜下观察形态均匀一致,折光性强,呈典型的“铺路石状”。透射电镜拍照显示细胞体积小,核浆比例大,细胞器发育不成熟,处于原始状态。绘制生长曲线显示,传代至P3-P6细胞具有较强的增值能力。流式细胞术所获得的数据通过统计学处理表明,所获细胞纯度可达90%以上。因此,我们的体会是联用显微分离技术、二步酶法以及差速贴壁法可获得纯度高、活性好的毛囊干细胞,联用CD34和β1整合素是较理想的鉴定方法。为进一步的诱导分化实验打下了良好的基础。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-10
前言  10-13
研究内容与方法  13-25
  1 引言  13
  2 材料与方法  13-25
    2.1 主要实验设备  13-14
    2.2 主要实验器械  14
    2.3 主要试剂  14-15
    2.4 试验准备  15-16
    2.5 主要试剂配制  16-17
    2.6 培养方法  17-20
    2.7 鉴定方法  20-25
结果  25-30
讨论  30-40
小结  40-41
致谢  41-42
参考文献  42-47
综述  47-53
  参考文献  51-53
攻读硕士学位期间发表的学术论文  53-54
导师评阅表  54

大鼠毛囊干细胞的分离培养和鉴定方法研究

内容摘要

全文目录

相似论文