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GLP-1对HepG2细胞糖异生关键酶G6Pase的影响及作用机制研究

作　者: 张雪兰
导　师: 谢云
学　校: 天津医科大学
专　业: 内科学
关键词: 胰高血糖素样肽-1 Exenatide 人肝细胞 葡萄糖-6-磷酸酶 磷脂酰肌醇-3-激酶
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：1.体外培养人肝肿瘤细胞HepG2细胞系,通过倒置显微镜观察细胞形态变化。2.研究胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)对HepG2细胞糖异生的作用及机制-PI3K通路。3.为GLP-1有效的降糖和改善肝胰岛素抵抗等临床治疗提供初步的理论依据。方法：1.体外培养人肝肿瘤细胞-HepG2细胞,通过倒置显微镜形态学观察。2.将培养的HepG2细胞随机分为4组：Control组,GLP-1 (10nmol/L)组,Insulin (10nmol/L)组,Exenatide (10nmol/L)组,除Control组外,其它三组分别干预4、8、24小时。Western blot方法测糖异生关键酶葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase, G6Pase)的蛋白表达,选出合适的干预时间。3.将培养的HepG2细胞随机分为9组：①Control组,②Insulin(10nmol/L)组,③GLP-1(10nmol/L)组,④Exenatide(10nmol/L)组,⑤LY294002(15μmol/L)组,⑥GLP-1 (10nmol/L)+Insulin(10nmol/L)组,⑦Exenatide(10nmol/L)+Insulin(10nmol/L)组,⑧GLP-1(10nmol/L)+LY294002(15μmol/L)组,⑨xenatide (10nmol/L)+LY 294002 (15μmol/L)组。干预一定时间后(时间待定),用蛋白质印迹(western blot)法测定各组G6Pase的蛋白表达。4.将培养的HepG2细胞随机分为3组：①Control组(5.6mmol/L葡萄糖),②10mmol/L葡萄糖组,③20mmol/L葡萄糖组。干预一定时间后(时间待定),western blot法测定各组G6Pase的蛋白表达。观察葡萄糖对G6Pase的影响。结果：1.HepG2肝细胞传代培养情况良好。2.western blot结果表明：与Control组比,GLP-1组、Insulin组、Exenatide组G6Pase的蛋白表达量较低,干预8小时后降低最明显,所以下一步实验干预时间选择8小时。3.(1)与Control组比,Insulin、GLP-1、Exenatide均能降低HepG2肝细胞G6Pase的蛋白表达量(P<0.05),表明Insuln、GLP-1、Exenatide都能抑制肝糖异生。(2)与Insulin组比,GLP-1-Insulin组和Exenatide+Insulin组G6Pase的蛋白表达量少(P<0.05)。说明GLP-1、Exenatide对G6Pase的抑制与Insulin有叠加作用,GLP-1、Exenatide调节肝糖异生代谢的通路可能与胰岛素不完全一致。(3)与GLP-1组比,GLP-1+LY294002组G6Pase的蛋白表达量增加(P<0.05)；与Exenatide组比,Exenatide+LY294002组G6Pase的蛋白表达量增加(p<0.05),说明PI3K通路介导了GLP-1、Exenatide对肝糖异生的调节。4.与5.6mmol/L葡萄糖组比,10mmol/L葡萄糖组G6Pase的蛋白表达量无明显变化,20mmol/L葡萄糖组G6Pase的蛋白表达量明显增加(P<0.05)。说明高糖可以促进肝细胞的糖异生或糖原分解作用。结论：本研究通过体外试验验证了GLP-1、Exenatide可直接作用于人肝细胞,调节肝糖异生代谢。试验结果也证实了GLP-1、Exenatide通过减少肝细胞G6Pase的合成,抑制非糖物质转化为糖,减少糖异生。在GLP-1、Exenatide干预的同时给予PI3K阻断剂LY294002后,人肝细胞G6Pase的表达量下降,肝糖异生作用受抑制。由此可知,GLP-1、Exenatide抑制人肝细胞糖异生的作用可能部分通过激活PI3K通路,增加FoxO1 (forkheadbox,Fox)因子(FoxO1因子可以抑制G6Pase基因表达)的表达从而下调G6Pase的基因表达,而使G6Pase蛋白合成减少。高浓度葡萄糖增加G6Pase蛋白表达,使糖异生增加。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
符号说明  10-11
前言  11-13
  研究现状、成果  11-12
  研究目的、方法  12-13
对象和方法  13-26
  1 人肝细胞HepG2细胞系的培养  13-15
    1.1 对象  13-14
    1.2 方法  14-15
  2 Western blot方法测定G6Pase蛋白的表达  15-24
    2.1 对象  15-20
    2.2 方法与步骤  20-24
  3 凝胶图像分析  24-25
  4 统计学处理  25-26
结果  26-34
  1 人肝细胞HepG2细胞系体外培养  26
  2 人肝细胞HepG2细胞系G6Pase的western blot法检测及图像分析  26-34
    2.1 western blot方法测定G6Pase的表达，选择最佳干预时间  26-30
    2.1 选定8小时为干预时间，western blot方法测定各组G6Pase的表达  30-32
    2.3 葡萄糖浓度对G6Pase的影响  32-34
讨论  34-41
  1 GLP-1概述  34-36
    1.1 GLP-1的合成、分泌与代谢  34
    1.2 GLP-1胰腺内的作用  34-35
    1.3 GLP-1胰腺外的作用  35-36
  2 GLP-1与肝糖代谢  36-38
  3 调节肝糖异生的信号通路  38-40
  4 葡萄糖浓度对G6Pase的影响  40-41
结论  41-42
参考文献  42-47
发表论文和参加科研情况说明  47-48
综述  48-62
  综述参考文献  57-62
致谢  62

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病
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