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脾切除对肝脏缺血再灌注损伤保护作用的研究

作　者: 夏仁鹏
导　师: 黄建华；丁翔
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 脾切除再灌注损伤肝脏缺血肝细胞凋亡基质金属蛋白酶9
分类号: R657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：探讨脾切除对肝脏缺血再灌注损伤的影响,以及可能的机制。方法：雄性Wistar大鼠60只,随机分成假手术组、缺血再灌注组、缺血再灌注+脾切除组,每组20只。采用无损伤血管夹夹闭供应肝左叶、中叶的肝动脉和门静脉,缺血1小时后开放血流,分别于再灌注3h、24h、48h、72h后处死大鼠,取肝脏及血液标本。检测各组及各时间点大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平,肝脏组织用HE染色判断肝脏损伤程度、中性粒细胞浸润情况。用实时PCR(RT-PCR)检测肝组织中基质金属蛋白酶9 (MMP-9) mRNA的表达情况。结果：再灌注3h后,缺血再灌注组和缺血再灌注+脾切除组的肝组织已经出现缺血再灌注损伤。再灌注24h后,缺血再灌注组和缺血再灌注+脾切除组中的ALT、AST、TBIL水平均达到最高水平,虽然缺血再灌注+脾切除组中ALT、AST、TBIL水平略高于缺血再灌注组,但是两组间的差异无统计学显著性。而再灌注48h和72h后,缺血再灌注+脾切除组中ALT、AST、TBIL水平显著低于缺血再灌注组(P<0.05)。肝细胞凋亡检测结果：各时间点假手术组(SH组)凋亡指数值均在正常范围内。3h、24h两时间点中IR组中凋亡指数略低于IR+ST组,但无统计学显著性；而48h、72h两时间点中IR+ST组凋亡指数均显著低于IR组,有统计学显著性(P<0.05)。高倍镜下中性粒细胞计数的结果可见：3h、24h两时间点中IR组中中性粒细胞计数略低于IR+ST组,但无统计学显著性；而48h、72h两时间点中IR+ST组中性粒细胞计数均显著低于IR组,有统计学显著性(P<0.05)。HE染色的结果：可见各时间点假手术组(SH组)肝小叶排列整齐,无明显组织损伤及中性粒细胞浸润。缺血再灌注组(IR组)：可见局部有组织缺血坏死及中性粒细胞浸润,3h时间点坏死面积为30±2.6%,24h时间点坏死面积大约占80±5.2%,48h时间点坏死面积为60±4.1%,72h时间点坏死面积为50±3.4%。缺血再灌注+脾切除组(IR+ST组)：在再灌注后3小时和24小时可见局部有组织缺血坏死及中性粒细胞浸润,与IR组相比,差异无统计学意义。再灌注48h后坏死面积大约占40±3.0%,再灌注72h后坏死面积为35±2.7%,组织坏死面积显著少于IR组,有统计学显著差异性(P<0.05)。用RT-PCR检测各组大鼠肝组织中MMP-9mRNA的表达,结果显示在再灌注48h后,IR+ST组较IR组MMP-9mRNA表达明显减弱,约为IR组的60.14±0.54%；再灌注72h后,IR+ST组较IR组MMP-9mRNA表达明显减弱,约为IR组的56.10±0.42%,差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论：1、脾切除对肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用,其保护作用在再灌注48h后更加显著；2、脾切除对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用可能与减少肝组织中中性粒细胞浸润,并减少MMP9mRNA的表达有关。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-11
第一章前言  11-14
第二章材料和方法  14-24
  2.1 材料  14-16
  2.2 方法  16-19
  2.3 取材  19
  2.4 HE染色  19-20
  2.5 ALT、AST、TBIL指标检测  20-21
  2.6 细胞凋亡检测  21-22
  2.7 肝脏中性粒细胞计数  22
  2.8 肝脏标本MMP9的RT-PCR检测  22-23
  2.9 统计学处理  23-24
第三章结果  24-33
  3.1 各实验组血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL)的差异  24-27
  3.2 细胞凋亡检测结果  27-28
  3.3 中性粒细胞浸润情况结果  28-29
  3.4 肝脏组织病理学结果  29-31
  3.5 肝脏组织MMP9 RT-PCR结果  31-33
第四章讨论  33-36
第五章结论  36-37
参考文献  37-40
综述  40-49
  参考文献  45-49
致谢  49

脾切除对肝脏缺血再灌注损伤保护作用的研究

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