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基底硬度对肝细胞和肝癌细胞迁移行为影响的比较研究

作　者: 谭乔燕
导　师: 王红兵
学　校: 重庆大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 肝细胞 肝细胞癌 基底硬度 迁移特征
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的通过比较分析不同硬度基底膜上肝细胞与肝癌细胞的迁移特征及其骨架构象和相关调节分子活性,探索肿瘤细胞迁移行为变化的成因,加深对肿瘤细胞迁移本质特征的认识。方法运用细胞形态学观察,图像分析软件等手段,分别对不同硬度基底上肝癌细胞,肝细胞迁移净距离、迁移速率、均方位移(Mean-squared Displacement, MSD)、随机运动频率(Random Motility Coefficient, D)、转向角和方向持续性(Directional Persistence, D/T)等参数进行定量分析;通过免疫荧光、酶谱等实验技术对不同硬度基底上细胞骨架变化及MMPs表达进行检测。结果不同硬度基底上HCCLM3和L02细胞的均方位移趋势一致,相对于极软(500Pa)和极硬(glass)基底,HCCLM3和L02细胞在较软基底(4000Pa)上具有较高的迁移速率和迁移净距离,且L02细胞对运动方向的维持能力较HCCLM3细胞高;加入40μg/mL MMPs抑制剂GM6001后,HCCLM3细胞的迁移速率、迁移净距离和对运动方向的维持能力一定程度的降低,L02细胞的迁移速率、迁移净距离和对运动方向的维持能力则显著降低;三维胶原基质中,HCCLM3细胞穿透基底膜的个数分别显著多于L02细胞穿透基底膜的个数;加入40μg/mLMMPs抑制剂GM6001后,HCCLM3细胞穿透基底膜的个数显著增加,而L02细胞穿透基底膜的个数显著减少。结论二维培养环境中,基底硬度对细胞迁移速率存在双向影响,L02细胞因有较高的方向持续能力而表现出高的迁移效率;三维胶原基质中,HCCLM3细胞释放出的阿米巴迁移行为是其具备更大侵袭能力的基础。

全文目录


中文摘要  3-4
英文摘要  4-7
英文缩写词表  7-8
1 绪论  8-21
  1.1 国内外研究现状  8-14
    1.1.1 肿瘤细胞迁移模式  8-11
    1.1.2 肿瘤细胞迁移模式转换的调控因素  11-13
    1.1.3 肿瘤细胞迁移模式转换调控的可能机制及信号途径  13-14
  1.2 细胞行为对基底硬度的依赖  14-17
    1.2.1 基底硬度对细胞形态的影响  14-15
    1.2.2 基底硬度对细胞迁移、定位的影响  15
    1.2.3 基底硬度调控细胞生物学行为的可能机制  15-17
  1.3 问题的提出及验证性实验设计  17-18
    1.3.1 问题的提出  17-18
    1.3.2 验证性实验设计  18
  1.4 研究意义  18-19
  1.5 技术路线  19-21
2 硬度可控体外培养模型的建立  21-25
  2.1 引言  21
  2.2 实验试剂和仪器设备  21-22
    2.2.1 实验仪器设备  21
    2.2.2 实验材料  21
    2.2.3 主要试剂的配制  21-22
  2.3 实验方法  22
    2.3.1 聚丙烯酰胺凝胶的制备  22
    2.3.2 聚丙烯酰胺凝胶剪切模量的测定  22
  2.4 实验结果  22-24
    2.4.1 子力显微镜对膜表面特性的检测  22-23
    2.4.2 不同硬度水凝胶基底膜剪切模量(G’)的测定  23-24
  2.5 讨论  24-25
3 基底硬度对肝细胞和肝癌细胞迁移特征的影响  25-50
  3.1 引言  25-26
  3.2 实验材料、试剂和仪器设备  26-27
    3.2.1 实验仪器与设备  26
    3.2.2 实验材料  26-27
    3.2.3 主要试剂的配制  27
  3.3 实验方法  27-30
    3.3.1 细胞培养  27
    3.3.2 细胞形态观察  27
    3.3.3 细胞运动能力分析  27-28
    3.3.4 细胞骨架的激光共聚焦检测  28
    3.3.5 流式细胞仪  28
    3.3.6 明胶酶谱  28-29
    3.3.7 胶原侵袭实验  29-30
    3.3.8 细胞杨氏模量测量  30
    3.3.9 统计分析  30
  3.4 实验结果及分析  30-47
    3.4.1 不同硬度水凝胶基底膜上细胞形态特征观测  30-33
    3.4.2 不同硬度水凝胶基底膜上细胞运动能力分析  33-37
    3.4.3 基底硬度对细胞转向角和方向持续性的影响  37-38
    3.4.4 基底硬度对细胞整合素表达的影响  38-39
    3.4.5 MMPs对细胞运动能力的影响  39-42
    3.4.6 MMPs表达分析  42-43
    3.4.7 不同胶原硬度对细胞侵袭的影响  43-46
    3.4.8 细胞杨氏模量的测定  46-47
    3.4.9 MMPs抑制剂对细胞MLCP的影响  47
  3.5 讨论  47-50
4 结论及展望  50-52
  4.1 主要研究工作及结论  50
  4.2 后续研究工作与展望  50-52
致谢  52-53
参考文献  53-59
附录  59
  A. 发表论文情况  59
  B. 参加科研项目情况  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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