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利用反义技术鉴定肝癌相关microRNA-224的功能研究

作　者: 王琪
导　师: 袁宏
学　校: 大连医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: microRNA-224 反义寡核苷酸 实时荧光定量PCR 细胞生长 细胞凋亡 肝癌细胞SMMC-7721
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:检测肝癌细胞SMMC-7721与张氏肝细胞中miRNA-224的表达情况。针对肝癌相关miRNA-224设计相应的反义寡核苷酸(AMO-miR-224) ,观察反义寡核苷酸AMO-miR-224对人肝癌细胞SMMC-7721生物活性的影响,并对其机制进行探讨。方法:体外培养肝癌细胞SMMC-7721与张氏肝细胞,并利用实时荧光定量PCR检测miRNA-224的表达情况;台盼蓝拒染法筛选出AMO-miR-224作用于SMMC-7721的最佳作用浓度与最佳作用时间;经AMO-miR-224作用后,流式细胞仪检测SMMC-7721细胞的凋亡情况;实时荧光定量PCR检测细胞miRNA-224的水平变化。结果:肝癌细胞SMMC-7721中miRNA-224的表达是张氏肝的9.54倍;浓度为0.3μmol∕L的AMO-miR-224作用于SMMC-7721 48小时后,能够抑制细胞的生长,且浓度增加抑制效果更明显;同样的条件下,AMO- miR-224也能够促进细胞的凋亡,且实时荧光定量PCR检测AMO-miR-224作用细胞后AMO组与随机对照组相比目的基因miRNA-224水平表达下调。结论: miRNA-224在肝癌细胞SMMC-7721中高表达,针对miRNA-224的AMO-miR-224能够有效地抑制SMMC-7721的生长并促进其凋亡,且实时荧光定量PCR显示AMO-miR-224能够降低miRNA-224在SMMC-7721中的表达。

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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