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丹参酮ⅡA诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的体外研究

作　者: 李志中
导　师: 王凭青；欧阳克清
学　校: 重庆大学
专　业: 植物学
关键词: 丹参酮ⅡA 细胞增殖细胞凋亡细胞周期
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 85次
引　用: 6次
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内容摘要

原发性肝癌(primary carcinoma of the liver)为我国常见的恶性肿瘤之一,其病理特征是肝癌细胞异常增生并侵袭其他组织器官。细胞凋亡是由多种因素参与调控的主动生理过程,按细胞或机体自身设置的程序进行,直到细胞被吞噬,以保持机体和组织的自稳。一旦细胞凋亡受到抑制,机体不能及时清除过多的、受损的或恶变的细胞,就会发生肿瘤。因此,诱导肝癌细胞凋亡成为治疗肝癌最有效的重要途径之一。丹参酮ⅡA是从活血化淤的中药丹参中提取的脂溶性有效成分(单体),其结构中含有醌型结构,易被氧化还原,可参与机体的多种生化反应而具有多种生物活性,在临床上主要用于心血管、关节炎等疾病的治疗。经研究证明丹参酮ⅡA不仅具有天然抗氧化、抗菌消炎作用,而且还具有明显的抗肿瘤作用,然而丹参酮ⅡA在诱导肝癌细胞凋亡作用及其机制方面的研究仍有待深入。本研究拟通过体外培养肝癌细胞HepG2,讨论丹参酮ⅡA在体外对人肝癌细胞HepG2的凋亡作用及其机制。方法:丹参酮ⅡA处理肝癌细胞HepG2,MTT比色法检测细胞增殖抑制的效果;琼脂糖凝胶电泳进行DNA Ladder检测;逆转录-聚合酶链反应(RT - PCR)检测p53、Bcl-2、Bax的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率。结果:丹参酮ⅡA抑制肝癌细胞HepG2增殖,抑制率呈时间、浓度依赖性;在24h、48h、72h,半数抑制浓度(IC50)分别为:7.4μg/ml、1.9μg/ml、0.6μg/ml;丹参酮ⅡA作用48h后,检测到清晰的DNA Ladder条带;p53、Bax表达水平显著加强,Bcl-2表达水平则明显下降;细胞周期停滞于G0/G1期,凋亡率显著性升高。结论:丹参酮ⅡA能够抑制肝癌细胞HepG2增殖,并通过p53、Bax和Bcl-2信号通路诱导其凋亡。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-8
1 绪论  8-20
  1.1 前言  8-9
  1.2 肝癌现状  9-12
    1.2.1 肝癌的地理分布和发病率  9
    1.2.2 肝癌临床表现  9-11
    1.2.3 肝癌病因学  11-12
  1.3 肝癌主要治疗手段  12-14
    1.3.1 手术切除  12-13
    1.3.2 非手术治疗  13-14
  1.4 细胞凋亡的基本概念  14-16
  1.5 细胞凋亡与肿瘤的发生  16-18
  1.6 中药与肿瘤治疗  18-20
2 材料和方法  20-25
  2.1 材料  20-21
    2.1.1 细胞株  20
    2.1.2 主要仪器与设备  20
    2.1.3 主要试剂及其配制  20-21
  2.2 实验方法  21-25
    2.2.1 细胞复苏  21
    2.2.2 细胞传代培养  21-22
    2.2.3 最佳细胞浓度实验  22
    2.2.4 丹参酮ⅡA 对 HepG2 细胞增殖抑制实验（MTT）  22
    2.2.5 细胞形态学观察  22-23
    2.2.6 琼脂糖凝胶电泳  23
    2.2.7 逆转录—聚合酶链式反应（RT–PCR）  23-24
    2.2.8 流式细胞仪对凋亡细胞的分选  24
    2.2.9 统计学处理  24-25
3 结果  25-32
  3.1 MTT 检测结果  25-27
    3.1.1 最佳细胞浓度实验及加药时间的选择  25
    3.1.2 DMSO 对 HepG2 细胞毒性实验  25-26
    3.1.3 丹参酮ⅡA 对 HepG2 细胞增殖抑制实验  26-27
  3.2 细胞形态学观察  27-29
  3.3 琼脂糖凝胶电泳  29-30
  3.4 RT-PCR 检测  30
  3.5 细胞周期检测  30-32
4 结果分析  32-37
  4.1 丹参酮ⅡA 对 HepG2 细胞增殖抑制实验  32-33
  4.2 丹参酮ⅡA 对 HepG2 细胞形态学的影响  33-34
  4.3 琼脂糖凝胶电泳  34
  4.4 凋亡相关基因表达变化的检测  34-35
  4.5 流式细胞仪检测  35-37
5 讨论  37-39
6 全文总结  39-41
  6.1 主要结论  39
  6.2 创新点  39
  6.3 后续工作建议  39-41
致谢  41-42
参考文献  42-47
附录  47
  A. 作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录  47

丹参酮ⅡA诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的体外研究

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