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青天葵遗传多样性研究

作　者: 魏智强
导　师: 杜勤
学　校: 广州中医药大学
专　业: 药剂学
关键词: 青天葵形态遗传多样性随机扩增多态性DNA
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 98次
引　用: 2次
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内容摘要

青天葵植物喜生于背阳坡的石缝中、石块旁、草丛中或树林下潮湿的腐殖土中。每年只长1片叶,少为2-3片,生长期较短,仅180天左右,单株产量低。青天葵以块茎作为繁殖途径,每年生1-2个新块茎。近年来由于价格上涨,滥采滥挖,通常连块茎也一起挖走,野生种质资源不断减少,日益濒危。但国内外市场的需求量却逐年加大,导致青天葵药材市场品种混乱,以次充好,以假当真。本研究的目的是在青天葵主产地区广东、广西、海南等地广泛收集青天葵野生种、栽培种、近缘野生种等种质资源,进行青天葵种质资源及其与伪品、近缘野生种的形态与分子鉴别研究,分析不同产地及来源青天葵的形态和分子遗传多样性,比较各种质资源间的亲缘关系及相似度。收集不同产地的毛唇芋兰及毛叶芋兰,从叶型、叶脉、叶片大小、叶重等10个形态学指标进行统计,并用SPSS统计分析软件进行处理分析。分子遗传多样性研究采中使用高盐低pH值法提取总DNA,采用随机扩增多态性DNA的方法,对多态性位点用SPSS统计分析软件进行聚类分析,用POPGENE软件计算Shonnon’s和Nei’s指数估算青天葵的遗传多样性。结果显示小叶青天葵的叶长大约为3 cm,宽约为4 cm,叶柄在4-6 cm之间;中叶青天葵叶长约为4 cm,叶宽约为5-6 cm,叶柄在6-10 cm之间;大叶青天葵的叶长大于6 cm,叶宽大于7 cm,叶柄长于10 cm。通过对13个青天葵样品的形态性状进行调查分析,发现不同品种的青天葵在叶型、叶脉、叶片大小、叶重等形态学数据上存在差异;聚类分析结果显示,以欧式距离15来看可分为两类,毛唇芋兰为一类,毛叶芋兰为一类,与种属间的分类一致;在毛唇芋兰品种中,又可分为小叶青天葵、中叶青天葵和大叶青天葵三类,大叶品种间的多样性与地理种源有一定的关联。使用高盐低pH值法可较好地提取新鲜叶片的DNA,药材叶片虽然含杂质较多,但也都能用于RAPD。优化的RAPD反应条件如下,反应体系为:2.0μL断缓冲液,0.5μL dNTP(各2.5 mM),0.8μL Mg~2+(25 mM),0.5μL引物(20 pmol/μL),0.2μLTaq酶(5 U/μL),1μL DNA(50 ng),1μL BSA(20 mg/mL),加双倍蒸馏水至20μL。扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,40℃退火30 s,72℃延伸60 s,40个循环;72℃延伸5 min。从49条随机引物中筛选能扩出清晰条带的引物19条,对22个青天葵样品、替代品及伪品进行RAPD分析,按样品来源分为干药材与新鲜药材,在干药材间小叶与中叶距离较近,大叶、毛叶距离远。新鲜叶片间三种青天葵为一类,青天葵与其组培品、毛叶与红薯叶距离稍远,与车前草、积雪草距离最远。利用Shannon’s数和Nei’s指数估计不同品种青天葵种群的遗传分化,Shannon’s指数显示总的遗传变异为0.463,而Nei’s指数显示总的遗传变异为0.276;在Shannon＇s指数中种群内的遗传变异占总变异的49.5%;而Nei’s指数中种群内的遗传变异占总变异的65.1%,青天葵基因流为0.949。小叶、中叶、大叶青天葵间的遗传差异较少,不同产地的青天葵遗传差异较大。结论:不同品种青天葵间及伪品在形态学和分子水平上存在遗传多样性。RAPD方法可用于青天葵的鉴别。青天葵的遗传多样性主要来自于不同的地理区域及生态环境。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-9
引言  9-11
第一部分文献研究  11-19
  一、青天葵研究  11-13
    (一) 本草研究  11
    (二) 组织培养  11-12
    (三) 鉴别研究  12
    (四) 化学成分研究  12-13
  二、遗传多样性研究  13-19
    (一) 形态遗传多样性  13-14
    (二) 分子遗传多样性  14-19
第二部分青天葵遗传多样性研究  19-49
  一、青天葵形态遗传多样性研究  19-26
    (一) 青天葵的形态研究  19-20
      1 全株形态  19
      2 叶的形态  19-20
      3 讨论  20
    (二) 青天葵形态多样性研究  20-26
      1 材料与方法  20-22
      2 实验结果  22-25
      3 讨论  25-26
  二、青天葵分子遗传多样性研究  26-49
    (一) DNA提取及RAPD方法的建立  26-33
      1 材料与方法  26-30
      2 结果与分析  30-32
      3 讨论  32-33
    (二) RAPD分析  33-49
      1 材料与方法  33-36
      2 结果与分析  36-46
      3 讨论  46-49
第三部分结论与展望  49-51
  一、结论  49-50
  二、展望  50-51
参考文献  51-57
附录1  57-64
附录2  64-65
致谢  65

青天葵遗传多样性研究

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