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血清中内源性磷酸化肽检测方法的建立及其在肺癌中应用

作　者: 李娟
导　师: 邹丽娟
学　校: 大连医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 蛋白组学血清内源性磷酸化肽肿瘤标志物
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

背景：肿瘤是由于一组蛋白质发生改变导致整个信号通路出现异常而最终发生的一种蛋白质组学疾病.寻找肿瘤生物标志物对临床早期诊断、病理分型、开发新的肿瘤药物靶点、药物干预治疗等具有重大价值,成为蛋白质组学的一个主攻方向.肺癌是半个世纪来发病率和死亡率上升极快,对人类健康和生命危害最大的恶性肿瘤,已跃居我国恶性肿瘤死亡原因首位。目前筛查早期肺癌的主要手段是影像学和痰脱落细胞学,其存在一定的漏诊和误诊,而病理学检查在临床上作为确诊的金标准却存在着对患者创伤大的缺点。所以导致多数肺癌患者不能早期发现、早期治疗,使患者的生存期生活质量和生存率受到影响。随着分子生物学的发展,肿瘤标志物已成为恶性肿瘤诊断的常用手段之一,对恶性肿瘤的筛查有重要临床价值。所以,如何发现肺癌肿瘤标志物已成为目前蛋白质组学研究热点。蛋白质磷酸化作为一种最广泛的蛋白质翻译后修饰(Post Translational Modifi-cations, PTMs),参与并调节着生命活动的几乎所有过程,包括细胞的增殖、细胞分化,肌肉收缩,神经活动,新陈代谢等。异常的磷酸化作用是人类疾病发生的根本原因之一,最显著的疾病是癌症。所以利用质谱的高灵敏度和快速检测能力分析磷酸化蛋白质,根据磷酸化蛋白质的变化来预测、判断、诊断疾病,可以大大提高其准确性,具有重要的生物学意义。目的：本实验选用丙酮对血清进行沉淀,采用一种超滤膜来净化沉淀后的上清液,再利用金属氧化物(Ti02)作为富集材料,对经过一系列前处理的血清进行富集,联合nano UPLC/Q-TOF蛋白组学分析方法,建立一种检测血清中内源性磷酸化肽的方法。通过考察多组肺癌患者和正常人血清中内源性磷酸化肽的差异,证明该方法有意义,为鉴定肺癌肿瘤标志物提供理论依据。方法：用标准品作为样本,建立一种超滤膜过滤、金属氧化物富集、及纳升级超高压液相色谱-质谱(nano UPLC-MS)联用技术检测磷酸化肽的方法。再对10例肺癌患者及10例正常人血清进行分装、丙酮沉淀及应用上述所建立的方法检测血清中内源性磷酸化肽。结果：1.经过实验条件摸索,选用10K超滤膜进行过滤,50%CH3OH/0.5FA溶剂进行溶解,0.5μLα—酪蛋白中加入5μL serum作为实验最低检测限,建立了一种蛋白组学中磷酸化肽检测的新方法。2.用上述建立的蛋白组学方法对血清进行检测：1.从肺癌患者血清中检测到14个内源性磷酸化肽,正常人血清中检测到10内源性磷酸化肽。结论：通过对肺癌患者及正常人血清中内源性磷酸化肽的检测、鉴定,成功的验证出所建立的蛋白组学方法的可用性及应用价值：1.建立了一种蛋白质组学对复杂样品的处理及检测理论方法。2.成功的从肺癌患者血清中检测到14个内源性磷酸化肽,从正常人血清中检测到10个内源性磷酸化肽。3.对肺癌患者和正常人血清中检测到的内源性磷酸化肽进行比较,验证两者有差异,为最终鉴定出肺癌肿瘤标志物打下基础。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-10
材料和方法  10-13
结果  13-21
讨论  21-25
结论  25-26
参考文献  26-28
综述  28-37
  参考文献  33-37
致谢  37-38

血清中内源性磷酸化肽检测方法的建立及其在肺癌中应用

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