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高同型半胱氨酸和高胰岛素对人血管内皮细胞TM表达的影响

作　者: 支翠菊
导　师: 柳洁
学　校: 山西医科大学
专　业: 内科学
关键词: 人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 罗格列酮糖尿病血栓调节蛋白(TM) 动脉粥样硬化(AS)
分类号: R543
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:观察高胰岛素和高同型半胱氨酸单独或联合对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达损伤标志物血栓调节蛋白(TM)的影响,并探讨其机制。方法:1.体外培养人脐静脉内皮细胞,并用加有不同浓度的胰岛素或不同浓度同型半胱氨酸的培养液分别孵育24h、48h、72h后,采用倒置显微镜观察细胞生长状态,MTT法测定细胞数量和功能;2.根据MTT的结果,选择合适的作用浓度,进行分组,并用一定浓度的罗格列酮进行干预。分组为①对照组②损伤组:高Hcy组、高Ins组、高Ins+高Hey组③药物干预组:高Hcy+Ros组、高Ins+Ros组、高Ins+高Hcy+Ros组。加药后分别孵育内皮细胞24h、48h、72h后,通过倒置显微镜观察细胞生长状态,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)、采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)、酶联免疫吸附法(ELISA)检测血栓调节蛋白(TM)的水平。结果:1.生理浓度和低浓度的胰岛素可促进血管内皮细胞增殖且有峰值,超过一定浓度的胰岛素抑制细胞的生长,且呈浓度、时间依赖性。低浓度的同型半胱氨酸对细胞生长的抑制作用不明显,随着浓度的增高,细胞生长抑制作用越来越明显,且呈浓度、时间依赖性。2.高浓度胰岛素和或/高浓度同型半胱氨酸均造成细胞损伤,与对照组相比MDA、TM的表达增加,SOD表达减少,呈浓度、时间依赖性;高胰岛素与高同型半胱氨酸混合培养的细胞损伤较相应的单纯培养损伤更明显,MDA、TM增加更显著,SOD表达减少更显著。3.加入罗格列酮能使高浓度胰岛素和高浓度同型半胱氨酸及混合培养的血管内皮细胞损伤减弱,MDA、TM较未加组含量减少,SOD含量增加。结论:1.胰岛素对于血管内皮细胞功能的影响是双相的:生理浓度和低浓度的胰岛素能促进血管内皮细胞的增殖,直接对血管内皮细胞产生保护作用,促进血管内皮的修复,可抗动脉粥样硬化形成,且呈浓度、时间依赖性;而高浓度的胰岛素抑制细胞的增殖,促进动脉粥样硬化的发生发展;2.低浓度的同型半胱氨酸对细胞的生长抑制不明显;但较高浓度的同型半胱氨酸对细胞生长产生抑制作用,是动脉粥样硬化的危险因素;3.高胰岛素和高同型半胱氨酸可损伤血管内皮细胞,使损伤标志物TM、脂质过氧化产物MDA表达增加,反映机体清除氧自由基能力的SOD表达减少,且呈现累积效应,二者通过氧化应激机制可促进动脉粥样硬化和糖尿病血管并发症的发生发展;4.罗格列酮对高胰岛素和高同型半胱氨酸造成的血管内皮细胞损伤有保护作用,可适度延缓糖尿病血管病变发生发展。

全文目录

英文词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
材料与方法  12-19
  一、材料  12-14
  二、实验方法  14-18
  三、统计学处理  18-19
结果  19-21
  一、光镜下观察细胞形态  19
  二、MTT测定结果  19
  三、胰岛素和同型半胱氨酸联合时间浓度的确定  19-21
附图  21-26
讨论  26-30
结论  30-31
参考文献  31-34
综述  34-39
  一、TM的结构与分布  34
  二、TM与PC的活化  34-35
  三、TM对纤维蛋白溶解的抑制作用  35
  四、TM与血管内皮细胞损伤  35-36
  五、糖尿病血管并发症与血浆中的血栓调节蛋白  36
  六、PTM可作为DN患者药物疗效的观察指标  36-39
作者简历  39-40
致谢  40

高同型半胱氨酸和高胰岛素对人血管内皮细胞TM表达的影响

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