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内质网应激在肾脏急性缺血/再灌注损伤中的作用研究

作　者: 肖敏
导　师: 梅长林；郑丰；胡惠民；王雪琦；赵学智；叶朝阳
学　校: 第二军医大学
专　业: 内科学
关键词: 急性肾损伤 内质网应激 未折叠蛋白反应 凋亡 葡萄糖调节蛋白78(GRP78) C/EBP同源蛋白(CHOP) 门冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶-12(Caspase12) 牛磺酸熊脱氧胆酸(TUDCA)
分类号: R692
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:通过建立急性肾损伤小鼠模型,检测不同时间点肾组织中内质网应激相关标志物的表达,从而探索急性肾损伤的发病机制,寻找新的治疗方法。方法:建立急性肾缺血再灌注损伤小鼠模型,收集损伤后0h、4h、12h、24h几个时间点的小鼠肾脏,利用HE、PAS染色和TUNEL染色评估不同时间点肾脏病理损伤程度和肾小管上皮细胞凋亡程度,用western-blot以及realtime PCR检测各时间点动物标本中内质网应激伴侣蛋白GRP78和凋亡蛋白CHOP、Caspase12的表达量及其相应的mRNA表达,从而得到内质网应激和肾脏急性缺血再灌注损伤之间的关系。选取药物牛磺酸熊脱氧胆酸(TUDCA)对肾脏急性缺血再灌注损伤进行干预,通过HE、PAS染色和TUNEL染色检测肾脏病理损伤程度和肾小管上皮细胞凋亡程度来评价药物的有效性,并通过检测GRP78、CHOP和Caspase12的表达量的变化,来探索该药物可能的作用机制。结果:(1)HE、PAS染色可见24h手术组中肾小管上皮细胞坏死明显,病变最重,较其它组有明显统计学差异(P<0.01)。TUNEL染色可见24h手术组小鼠肾小管上皮细胞凋亡指数最高(P<0.01)。Western-blot结果显示未折叠蛋白反应伴侣蛋白GRP78和凋亡蛋白CHOP在再灌注后12小时表达最多(P<0.01);Caspase12在损伤后12小时剪切最多(P<0.01)。Real-time PCR结果显示GRP78、CHOP和Caspase12 mRNA水平在肾脏缺血/再灌注后4小时升至峰值(P<0.05),之后逐渐下降。(2)牛磺酸熊脱氧胆酸(TUDCA)干预急性肾损伤后,HE、PAS染色显示病理评分明显改善,较生理盐水手术组有统计学差异(P<0.05),TUNEL染色可见凋亡减少,与生理盐水手术组比较有统计学差异(P<0.05)。Western-blot结果显示未折叠蛋白反应伴侣蛋白GRP78和凋亡蛋白CHOP在TUDCA干预的手术组中,表达明显下调,与生理盐水手术组比较具有显著差异(P<0.01);Caspase12在TUDCA干预的手术组中剪切减少,较生理盐水手术组有明显差异(P<0.05)。Real-time PCR结果显示在肾脏缺血前给予TUDCA干预,GRP78 mRNA表达下调,与生理盐水手术组比较有统计学差异(P<0.05),CHOP和caspase12的mRNA表达也下调,与生理盐水手术组比较有明显统计学差异(P<0.01)。结论:在夹闭小鼠左侧肾动脉致急性肾脏缺血/再灌注损伤模型中,左侧肾脏组织学损伤显示再灌注后24小时最严重。GRP78、CHOP和Caspase12在再灌注后其mRNA和蛋白表达水平明显升高或激活,其变化早于组织学改变。提示内质网应激可能在急性肾脏缺血/再灌注损伤中发挥了重要作用。而TUDCA术前给药可明显减轻肾脏急性缺血再灌注损伤,改善组织学评分及组织细胞凋亡情况,其作用机制可能与该药物影响内质网应激有关。本研究为急性肾损伤的治疗提供了实验基础和理论依据,具有重要的临床价值和现实意义。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-10
缩略词表  10-12
详细摘要  12-18
前言  18-22
第一部分 内质网应激在肾脏急性缺血再灌注损伤中的作用研究  22-50
  一、引言  22
  二、材料与方法  22-35
    （一） 主要材料  22-26
    （二） 方法  26-35
  三、结果  35-47
    （一） 缺血再灌注损伤对肾脏组织形态学的影响  35-41
    （二） 急性肾脏缺血再灌注损伤作用机制的研究结果  41-47
  四、讨论  47-50
第二部分：TUDCA治疗肾脏急性缺血再灌注损伤的实验研究  50-72
  一、引言  50
  二、材料与方法  50-59
    （一） 主要材料  50-51
    （二） 方法  51-59
  三、结果  59-69
    （一） TUDCA对急性肾脏缺血再灌注损伤保护作用的组织形态学表现  59-64
    （二） 急性肾脏缺血再灌注损伤作用机制的研究结果  64-69
  四、讨论  69-72
全文小结  72-73
参考文献  73-76
致谢  76-78
综述  78-85
  参考文献  83-85
附录  85

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 泌尿科学（泌尿生殖系疾病） > 肾疾病
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