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蛋白质的共振光散射光谱法研究

作　者: 牧丹
导　师: 张寒琦
学　校: 吉林大学
专　业: 分析化学
关键词: 共振光散射光谱法蛋白质还原剂阴离子表面活性剂 (NH4)2SO4
分类号: O629.73
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

论文主要研究了共振光散射技术在蛋白质测定中的应用。第一章介绍了共振光散射光谱法的原理、特点、发展历程、应用等。概述了目前测定蛋白质的方法。第二章研究了强还原剂(β-巯基乙醇、二硫苏糖醇等)对蛋白质和阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠体系共振光散射强度的影响,提出了两种测定蛋白质的共振光散射光谱法。对各物质及其相互作用后的共振光散射光谱进行了详细的研究,证实了使用强还原剂能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂,促进牛血清白蛋白与十二烷基苯磺酸钠之间的结合而可提高体系信号和方法的灵敏度。考查了影响共振光散射强度的各种因素,如pH、还原剂的浓度、表面活性剂的浓度、试剂的加入顺序和共存物质等。实验结果表明,所建立的共振光散射光谱法可以成功地用于蛋白质的测定。第三章基于硫酸铵能与蛋白质发生盐析作用,促进蛋白质分子凝聚,形成蛋白质沉淀而引起体系共振光散射强度的增强,建立了一种以硫酸铵为蛋白质的共振光散射探针,快速简便检测蛋白质的新方法。研究了牛血清白蛋白—硫酸铵、人血清白蛋白—硫酸铵和卵清白蛋白—硫酸铵体系的共振光散射光谱,考查了体系的酸度、硫酸铵的饱和度和共存离子等对体系共振光散射强度的影响。将所建立的测定蛋白质的共振光散射光谱法应用到合成样品及实际样品的分析并与传统的考马斯亮蓝法比较,结果令人满意。

全文目录

提要  5-9
第一章前言  9-29
  1.1 光散射现象  9-11
    1.1.1 散射光的产生  9-10
    1.1.2 光散射类型  10-11
  1.2 共振光散射技术的概述  11-19
    1.2.1 共振光散射技术用于分析测定的的原理  11-12
    1.2.2 共振光散射技术的发展历程  12-13
    1.2.3 共振光散射技术的特点  13-14
    1.2.4 共振光散射技术的应用  14-16
      1.2.4.1 在蛋白质测定中的应用  14-15
      1.2.4.2 在核酸测定中的应用  15-16
      1.2.4.3 在环境分析中的应用  16
    1.2.5 目前发展的新的共振光散射技术  16-19
  1.3 目前测定蛋白质的其它方法  19-20
  1.4 论文的主要内容  20-21
    1.4.1 蛋白质—还原剂—阴离子表面活性剂体系  20-21
    1.4.2 蛋白质—硫酸铵体系  21
  1.5 参考文献  21-29
第二章蛋白质-还原剂-表面活性剂体系  29-46
  2.1 实验部分  30-31
    2.1.1 仪器与试剂  30-31
      2.1.1.1 仪器  30-31
      2.1.1.2 试剂  31
    2.1.2 实验方法  31
      2.1.2.1 牛血清白蛋白—β-巯基乙醇—十二烷基苯磺酸钠体系  31
      2.1.2.2 牛血清白蛋白—二硫苏糖醇—十二烷基苯磺酸钠体系  31
    2.1.3 仪器参数  31
  2.2 BSA—Β-ME—SDBS 体系共振光散射光谱的研究  31-37
    2.2.1 BSA—β-ME—SDBS 相互作用的光谱特征  31-32
    2.2.2 条件的优化  32-35
      2.2.2.1 酸度的影响  32-33
      2.2.2.2 β- ME 浓度的影响  33-34
      2.2.2.3 SDBS 浓度的影响  34-35
      2.2.2.4 试剂加入顺序的影响  35
    2.2.3 共存物质的影响  35
    2.2.4 标准曲线  35-36
    2.2.5 样品分析  36-37
      2.2.5.1 合成样品的分析  36-37
      2.2.5.2 人血清样品的分析  37
  2.3 BSA—DTT—SDBS 体系共振光散射光谱的研究  37-44
    2.3.1 BSA—DTT—SDBS 相互作用的光谱特征  37-38
    2.3.2 条件的优化  38-41
      2.3.2.1 酸度的影响  38-39
      2.3.2.2 DTT 浓度的影响  39-40
      2.3.2.3 SDBS 浓度的影响  40-41
      2.3.2.4 试剂加入顺序的影响  41
    2.3.3 共存物质的影响  41-42
    2.3.4 标准曲线  42-43
    2.3.5 样品分析  43-44
      2.3.5.1 合成样品的分析  43
      2.3.5.2 人血清样品的分析  43-44
  2.4 小结  44
  2.5 参考文献  44-46
第三章以硫酸铵为探针检测蛋白质的共振光散射光谱法研究  46-58
  3.1 实验部分  47-48
    3.1.1 仪器与试剂  47
      3.1.1.1 仪器  47
      3.1.1.2 试剂  47
    3.1.2 实验方法  47
    3.1.3 仪器参数  47-48
  3.2 结果与讨论  48-55
    3.2.1 蛋白质—(NH_4)_2SO_4体系的光谱特征  48
    3.2.2 条件的优化  48-54
      3.2.2.1 酸度的影响  48-51
      3.2.2.2 (NH_4)_2SO_4 饱和度的影响  51-53
      3.2.2.3 共存物质的影响  53
      3.2.2.4 标准曲线  53-54
    3.2.3 样品分析  54-55
      3.2.3.1 合成样品的分析  54
      3.2.3.2 实际样品的分析  54-55
  3.3 小结  55
  3.4 参考文献  55-58
致谢  58-59
附录  59-60
摘要  60-62
Abstract  62-63

蛋白质的共振光散射光谱法研究

内容摘要

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