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去神经对大鼠肝再生的影响研究

作　者: 文园园
导　师: 张新胜
学　校: 河南师范大学
专　业: 发育生物学
关键词: 肝再生部分肝切除去神经银染法免疫组织化学
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究去交感神经、去迷走神经和完全去神经对大鼠肝再生的影响,初步探讨神经在肝再生中的作用及机制。方法:将168只雄性SD大鼠随机分为4组:部分肝切除(PH)组、去交感神经后肝切除(PHS)组、去迷走神经后肝切除(PHV)组、完全去神经后肝切除(PHT)组。4组大鼠分别在手术后12h、24h、36h、48h、72h、120h、168h处死取材,测量各时间点肝/体重比;用银染法显示肝细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs);用ELISA法检测大鼠血清中雌激素含量;用免疫组织化学法检测肝细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:(1)大鼠肝/体重比:在术后48h和168h,PHS组肝/体重比显著大于PH组(P<0.05);在术后168h,PHV组肝/体重比显著小于PH组(P<0.05);在术后48～120h,PHT组肝/体重比大于PH组,但无明显差异。在术后168h时,PHT组肝/体重比显著大于PH组(P<0.05)。(2)肝细胞核AgNORs:与PH组比较,PHS组大鼠再生肝细胞内AgNORs平均数在术后24h～48h和120h显著减少(P<0.05),峰值向后延迟。再生肝细胞内AgNORs平均直径有所增大,仅在术后168h有显著性差异(P<0.05);PHV组大鼠再生肝细胞内AgNORs平均数在术后24h和48h显著增加(P<0.05),在术后36h显著减少(P<0.05),AgNORs平均数峰值从术后36h延迟到术后48h。AgNORs平均直径在术后36h～72h和168h显著增大(P<0.05),峰值由术后24h～48h延迟到36h～48h;PHT组大鼠再生肝细胞AgNORs平均数的变化与PHV组的一致,即在术后24h和48h显著增加(P<0.05),在术后36h显著减少(P<0.05),AgNORs平均数峰值从术后36h延迟到术后48h。AgNORs平均直径在术后24h～168h显著增大(P<0.05)。(3)肝细胞PCNA的表达:与PH组比,PHS组各时间点PCNA阳性表达数均有所减少,而在术后24h～48h和168h有显著性差异(P<0.05);PHV组在术后各时间点PCNA阳性表达数均有所增加,在术后24h、72h、120h,PCNA阳性表达数有显著性差异(P<0.05);PHT组PCNA阳性表达数均有所增加,在术后12～36h和72～168h则有显著性差异(P<0.05)。(4)血清雌激素的含量:与PH组比,PHS组大鼠血清雌激素含量在术后12h～24h和120h～168h显著降低(P<0.05)。PHV组大鼠血清中雌激素含量在术后12h～36h显著增加(P<0.05),在术后120h～168h显著降低(P<0.05)。PHT组大鼠在术后12h～24h显著增加(P<0.05),在术后36h～168h显著降低(P<0.05)。(5)肝细胞MMP-9的表达:与PH组比,在术后24h～48h和120h,PHS组大鼠表达显著降低(P<0.05),但术后72h肝细胞内MMP-9显著增加(P<0.05);PHV组大鼠各时间点肝细胞内MMP-9表达均有所增加,在术后12h～120h有显著性差异(P<0.05);PHT组大鼠肝细胞内MMP-9含量在术后12h～168h均有所增加,在术后36h、72h、120h有显著增加(P<0.05)。结论:以上结果提示:(1)去交感神经在术后12h～120h对大鼠肝再生有抑制作用,在术后168h对大鼠肝再生有促进作用;去迷走神经在术后12h～120h对大鼠肝再生有促进作用;完全去神经在术后12h～168h对大鼠肝再生有促进作用。(2)去神经对大鼠肝再生的调节作用可能是通过调节大鼠血清中雌激素含量来参与肝细胞的早期增殖过程,通过调节肝细胞MMP-9的表达水平来调节肝组织的重建来实现的。

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摘要 4-6ABSTRACT 6-12缩略语表 12-13第一章文献综述 13-27 1.1 神经对大鼠肝脏的支配 13-14 1.1.1 大鼠肝脏周围的神经分布 13 1.1.2 大鼠肝脏内神经分布 13-14 1.2 神经对肝脏的调节 14-19 1.2.1 交感神经对肝脏功能的影响 14-15 1.2.2 肝迷走神经对肝脏功能的影响 15-17 1.2.3 去肝神经支配对肝脏功能的影响 17-19 1.2.4 肝移植对肝功能的影响 19 1.3 大鼠肝再生的研究现状 19-23 1.3.1 大鼠肝再生机制研究 19-20 1.3.2 AgNORs 颗粒数与肝再生的关系 20-21 1.3.3 PCNA 与细胞增殖和肝再生的关系 21-22 1.3.4 MMP-9 与肝再生的关系 22 1.3.5 雌激素与肝再生的关系 22-23 1.4 去肝神经对肝再生的影响 23-26 1.4.1 去神经动物模型的建立 23-24 1.4.2 去交感神经对肝再生的影响 24-25 1.4.3 去迷走神经对肝再生的影响 25 1.4.4 完全去神经对肝再生的影响 25-26 1.5 本研究的目的和意义 26-27第二章材料与方法 27-33 2.1 材料 27 2.1.1 实验动物 27 2.1.2 主要试剂 27 2.1.3 主要仪器 27 2.2 动物模型的制备 27-28 2.2.1 大鼠2/3 肝切除模型的建立 27-28 2.2.2 大鼠肝脏去迷走神经再生肝模型的建立 28 2.2.3 大鼠肝脏去交感神经再生肝模型的建立 28 2.2.4 大鼠肝脏完全去神经再生肝模型的建立 28 2.3 动物分组、取材与制片 28-29 2.4 肝/体重比的计算 29 2.5 AgNORs 颗粒的显示和计算 29 2.5.1 银染的步骤 29 2.5.2 统计 AgNORs 颗粒数和平均直径 29 2.6 免疫组化法检测 PCNA 的表达 29-30 2.6.1 二步法免疫组化的步骤 29-30 2.6.2 统计 PCNA 的阳性表达细胞数 30 2.7 免疫组化法检测 MMP-9 的表达 30 2.7.1 二步法免疫组化的步骤 30 2.7.2 MMP-9 的阳性表达的检测 30 2.8 ELISA 法检测大鼠血清中雌激素含量 30-31 2.8.1 操作步骤 30-31 2.8.2 酶标仪检测雌激素的OD 值 31 2.9 统计学处理 31-33第三章结果 33-45 3.1 肝/体重比 33-34 3.1.1 去交感神经对大鼠肝/体重比的影响 33 3.1.2 去迷走神经对大鼠肝/体重比的影响 33-34 3.1.3 完全去神经对大鼠肝/体重比的影响 34 3.2 肝细胞核 AgNORs 34-38 3.2.1 去交感神经对肝细胞核内 AgNORs 颗粒的影响 34-36 3.2.2 去迷走神经对肝细胞核内 AgNORs 颗粒的影响 36-37 3.2.3 完全去神经对肝细胞核内 AgNORs 颗粒的影响 37-38 3.3 肝细胞内 PCNA 的表达 38-40 3.3.1 去交感神经对大鼠再生肝细胞内 PCNA 表达的影响 38-39 3.3.2 去迷走神经对大鼠再生肝细胞内 PCNA 表达的影响 39 3.3.3 完全去神经对大鼠再生肝细胞内 PCNA 表达的影响 39-40 3.4 肝细胞内 MMP-9 的表达 40-42 3.4.1 去交感神经对大鼠再生肝细胞内 MMP-9 表达的影响 40-41 3.4.2 去迷走神经对大鼠再生肝细胞内 MMP-9 表达的影响 41 3.4.3 完全去神经对大鼠再生肝细胞内 MMP-9 表达的影响 41-42 3.5 去神经对血清中雌激素含量的影响 42-45 3.5.1 去交感神经对血清中雌激素含量的影响 42-43 3.5.2 去迷走神经对血清中雌激素含量的影响 43 3.5.3 完全去神经对血清中雌激素含量的影响 43-45第四章讨论 45-53 4.1 大鼠肝脏去神经动物模型的选择 45 4.2 去神经对大鼠肝/体重比的影响 45-46 4.3 去神经对肝细胞核内 AgNORs 的影响 46-48 4.4 去神经对肝细胞内 PCNA 表达的影响 48-49 4.5 去神经对肝细胞内 MMP-9 表达的影响 49-50 4.6 去神经对雌激素含量的影响 50-53第五章结论 53-55参考文献 55-65附录 65-77致谢 77-79攻读硕士学位期间发表论文的清单 79-80

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