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不同鼠龄大鼠视网膜干细胞的体外培养及鉴定

作　者: 穆毓
导　师: 苏冠方
学　校: 吉林大学
专　业: 临床医学
关键词: 视网膜干细胞分离鉴定
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

视网膜干细胞作为神经干细胞的一种,具有可以体外分离、诱导的潜能,并且理论上可以移植入受损伤眼内治疗不可逆性视网膜疾病。与其他来源干细胞相比,视网膜干细胞又以其容易获得,具有良好的组织同源性,不易发生免疫排斥反应等优点成为研究的热点。本实验拟通过对不同鼠龄来源视网膜干细胞的培养,探讨不同年龄阶段视网膜干细胞的特点,建立成熟的体外分离、培养及鉴定方法,为进一步研究其分化机理和治疗潜能奠定理论基础。分别取鼠龄为孕18天,出生后48小时,7天,13天,21天,2个月Wistar大鼠的睫状体部(含色素层)于无血清添加外源性生长因子,且没有神经营养添加剂的培养液中培养。取出生后大鼠的视网膜组织在上述培养液中培养,作为阴性对照。取孕18天胎鼠的脑组织在相同培养条件下培养,作为阳性对照。通过目的细胞形态与同条件生长的视网膜细胞和胎鼠的脑组织培养所得细胞相比较,发现出生后的大鼠视网膜中不存在可以增殖、具有自我更新能力的干细胞,而从睫状体部提分离培养所得的细胞生长形态与胎鼠培养获得的神经干细胞形态相似,都能形成悬浮生长的细胞团,且传代后重新形成细胞团。免疫荧光方法对细胞团细胞进行鉴定,nestin反应呈阳性。通过不同鼠龄视网膜干细胞的分离、培养及鉴定发现:从胚胎大鼠视网膜中可以培养出表型与视网膜干细胞相似的细胞;出生后至成年阶段大鼠睫状边缘区存在具有自我更新及多分化潜能的神经干细胞,出生13日内大鼠睫状体中分离出来的视网膜干细胞较容易进行体外培养;出生后大鼠视网膜中未分离出可以体外培养的干细胞。

全文目录

内容提要  5-8
英文缩略词  8-9
前言  9-11
第1章综述  11-20
第2章材料与方法  20-24
  2.1 实验动物  20
  2.2 药品、试剂  20
  2.3 主要仪器  20-21
  2.4 实验方法  21-24
    2.4.1 大鼠视网膜干细胞的分离  21-23
    2.4.2 大鼠视网膜干细胞的传代培养  23
    2.4.3 大鼠视网膜干细胞免疫荧光法鉴定  23
    2.4.4 大鼠视网膜干细胞的分化  23-24
第3章结果  24-28
  3.1 大鼠视网膜干细胞培养结果  24-26
    3.1.1 胚胎鼠视网膜组织培养  24
    3.1.2 出生后大鼠睫状边缘带（含色素层）组织培养  24-25
    3.1.3 出生后大鼠视网膜组织培养  25
    3.1.4 胚胎大鼠脑组织培养  25-26
  3.2 免疫荧光鉴定结果  26
  3.3 大鼠视网膜干细胞体外分化  26-28
第4章讨论  28-33
  4.1 视网膜干细胞的鉴定  28-30
  4.2 视网膜干细胞的取材  30-31
  4.3 视网膜干细胞培养条件  31-32
  4.4 生长因子是神经干细胞有丝分裂原  32-33
第5章结论  33-34
附图  34-36
参考文献  36-39
致谢  39-40
中文摘要  40-43
Abstract  43-45

不同鼠龄大鼠视网膜干细胞的体外培养及鉴定

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