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DFMG对LPC诱导HUVE-12活性氧产生及线粒体凋亡途径的影响

作　者: 谭锦盛
导　师: 符晓华
学　校: 湖南师范大学
专　业: 内科学
关键词: 7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀异黄素 溶血性磷脂酰胆碱 人脐静脉内皮细胞 细胞凋亡 氧化应激损伤 线粒体凋亡途径
分类号: R543.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：探讨新型金雀异黄素(genistein, GEN)类似物7-二氟甲氧基-5,4’-二甲氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxy-5,4’-dimethoxygenistein, DFMG)拮抗溶血性磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine, LPC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)凋亡是否涉及阻断活性氧产生及由活性氧触发的线粒体凋亡途径。方法：体外培养HUVE-12, LPC (0,3,10,30,100μmol/L)处理24 h,应用流式细胞术检测活性氧平均荧光强度,探索和确定LPC诱导HUVE-12活性氧生成模型的浓度。0.3、1.0、3.0μmol/L的DFMG预孵育30 min,30μmol/L的LPC处理HUVE-12 24 h,应用流式细胞术检测DFMG作用后LPC诱导HUVE-12活性氧生成和线粒体膜电位崩塌的影响,用荧光显微镜观察比较各组细胞荧光染色状态；应用Western blotting分析DFMG对LPC诱导HUVE-12活性氧生成模型细胞色素C、磷酸化JNK和PARP蛋白表达的影响。结果：①LPC 30μmol/L孵育HUVE-12 24 h后活性氧产生显著增加,平均荧光强度高达188.28±11.16,与细胞对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)；作为后续实验中LPC诱导HUVE-12活性氧生成模型的造模浓度。②0.3、1.0、3.0μmol/L的DFMG呈浓度依赖性减少LPC诱导HUVE-12活性氧产生,与LPC 30 umol/L模型组比较,差异具有统计学意义(P<0.001),平均荧光强度分别为99.48±2.51,94.13±3.35,72.59±3.54；较相应浓度GEN作用后的荧光强度(118.64±6.70,106.41±4.62,86.55±4.26)低(P<0.05)。③LPC 30μmol/L细胞孵育24 h后,HUVE-12线粒体膜电位水平显著下降(3601.91±1.43),与细胞对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)；0.3、1.0、3.0μmol/L的DFMG以浓度依赖方式拮抗LPC诱导HUVE-12线粒体膜电位水平下降,与LPC 30μmol/L模型组比较,差异有统计学意义(P<0.001),其线粒体膜电位分别为5084.93±4.525118.24±7.99,5741.19±3.80,较相应浓度GEN预孵育后的线粒体膜电位(4917.24±3.36,5032.08±3.49,5554.86±6.50高(P<0.05)。④LPC使HUVE-12凋亡相关蛋白细胞色素C、磷酸化JNK、PARP蛋白表达上调,LPC模型组的细胞色素C、磷酸化JNK、PARP蛋白产物条带与β-actin产物条带积分光密度值之比为0.29、0.69、1.20,分别是DFMG实验组的3.62倍、2.09倍、2.45倍,是GEN实验组的1.81倍、1.44倍、1.76倍,提示DFMG、GEN均可下调LPC损伤后上述蛋白的表达,DFMG的这种作用较相同浓度的GEN强。结论：DFMG拮抗LPC诱导HUVE-12凋亡与其阻断细胞活性氧产生及由活性氧激发的线粒体凋亡途径有关。

全文目录


中文摘要  3-5
英文摘要  5-9
1. 引言  9-12
2. 材料与方法  12-19
  2.1 材料  12-13
  2.2 方法  13-19
3. 结果  19-33
  3.1 LPC诱导HUVE-12活性氧生成模型的制备  19-21
  3.2 DFMG对LPC诱导HUVE-12活性氧产生的影响  21-25
  3.3 DFMG对LPC诱导HUVE-12线粒体膜电位下降的影响  25-29
  3.4 DFMG对LPC诱导HUVE-12线粒体凋亡途径相关蛋白表达的影响  29-33
4 讨论  33-38
  4.1 PLC与动脉粥样硬化中细胞凋亡的关系  33-35
  4.2 DFMG对LPC诱导HUVE-21活性氧生成及线粒体膜电位崩塌 的拮抗作用  35-36
  4.3 DFMG对PLC诱导HUVE-21凋亡拮抗作用机制探索  36-38
5 结论  38-39
参考文献  39-43
综述  43-53
  参考文献  50-53
英文缩写词表  53-54
攻读硕士学位期间的主要成果  54-55
致谢  55-57

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