学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

嗜热四膜虫中Chromodomain蛋白Tcd3和Tcd4的表达调控与功能分析

作　者: 张理光
导　师: 王伟
学　校: 山西大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: Chromodomain 嗜热四膜虫 TCD3 TCD4 RACE
分类号: Q75
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 0次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


Chromodomain （chromatin organization modifier domain）是一个由30～50个氨基酸组成的保守的蛋白质结构域,含有Chromodomain的蛋白质广泛存在于多种生物中的染色质结合蛋白中,通过与组蛋白或RNA的作用参与了异染色质的形成及基因的表达调控。四膜虫中程序性全基因组重排在有性生殖过程中发生,siRNA, MeH3K9, Pdd1p和Pdd3p参与这一过程,然而其详细机制仍不清楚。本研究从四膜虫基因组中筛选到两个含有Chromodomain的基因TCD3（Tetrahymena Chromo Domain 3）与TCD4（Tetrahymena Chromo Domain 4）,对这两个基因的表达调控和细胞定位进行了研究,获得的主要结果如下：1.TCD3和TCD4序列分析通过生物信息学的方法,从四膜虫大核基因数据库鉴定了TCD3 （TTHERM00585180）和TCD4 （TTHERM00585190）,两个基因串联于同一条大核染色体上,间隔237bp,两个基因内均具有GT-AG的内含子。TCD3和TCD4基因拟编码的蛋白334个和344个氨基酸残基组成,分子量分别为40.26kDa和41.11kDa,等电点（pI）分别为4.590和5.435。全基因表达Microarray分析表明TCD3和TCD4在四膜虫营养生殖阶段和饥饿期不表达,在有性生殖过程中8h时表达量最高,并且两者的表达谱一致。2.TCD3和TCD4的5’和3’-RACE TCD3和TCD4的ORF分别为1005bp和1035bp,大核染色体中基因全长分别为1241bp和1429bp,各含有两个内含子。5’RACE和3’RACE表明TCD3和TCD4的5’端非编码区（5’-UTR）长度分别为40bp和43bp,3’端非编码区（3’-UTR）长度分别为90bp和189bp。Chromodomain聚类分析表明Tcd3和Tcd4与pddlp蛋白的Chromodomain最为相似,SWISS—MODEL预测发现Tcd4的Chromodomain缺失α-螺旋结构。3.Tcd3和Tcd4的免疫荧光定位构建含有HA标签的表达载体OE-PBX-TCD3和OE-PBX-TCD4,转化四膜虫CU428和B2086细胞株,通过巴龙霉素筛选,PCR鉴定,获得HA-Tcd3和HA-Tcd4的过表达细胞株。激光共聚焦显微镜对HA-Tcd3和HA-Tcd4的免疫荧光定位发现：HA-Tcd3定位于四膜虫有性生殖核发育的亲本大核和新发育的大核中；HA-Tcd4则定位于conjusome和新发育的大核中。TCD3和TCD4相似的序列特征,保守的Chromodomain位置,一致的表达谱,表明两个基因中的一个很可能源于基因复制,进而加强该基因的功能。TCD3和TCD4在四膜虫接合生殖时期特异表达,都能够定位于新的发育的大核中,表明Tcd3和Tcd4极有可能参与了新的大核发育过程中程序性基因组重排。Tcd3和Tcd4在亲本大核和conjusome特异的定位,以及不同的模型结构,暗示基因TCD3和TCD4在进化过程中产生了新的功能。这些研究为进一步探讨chromodomain蛋白的功能提供了新的数据。

全文目录


中文摘要  9-11ABSTRACT  11-13第一章 文献综述  13-30  1.1 Chromodomain的发现  13  1.2 Chromodomain的结构及功能  13-18    1.2.1 Chromodomain的结构  13-17    1.2.2 Chromodomain的功能  17-18  1.3 含有Chromodomain的蛋白家族  18-22    1.3.1 含有单个Chromodomain的Polycomb型蛋白质  19-21    1.3.2 含有Chromodomain和CSD的HP1型蛋白  21-22    1.3.3 含有两个经典Chromodomain的蛋白  22    1.3.4 含有三个Chromodomain的蛋白质  22  1.4 四膜虫的特点及本课题的意义  22-24    1.4.1 四膜虫的生物学特征及其研究优势  22-23    1.4.2 本课题的研究意义  23-24  参考文献  24-30第二章 嗜热四膜虫中TCD3和TCD4基因的表达谱分析  30-35  2.1 方法  30    2.1.1 TCD3和TCD4基因的生物信息学分析  30    2.1.2 TCD3和TCD4基因的表达谱  30  2.2 结果  30-32    2.2.1 TCD3和TCD4基因的分析  30-32    2.2.2 TCD3和TCD4基因的表达谱分析  32  2.3 讨论  32-34  参考文献  34-35第三章 嗜热四膜虫中TCD3和TCD4基因的5'和3'-RACE及序列分析  35-44  3.1 材料  35-37    3.1.1 菌株和质粒  35    3.1.2 主要试剂和工具酶  35-36    3.1.3 主要试剂的配制  36    3.1.4 主要仪器设备  36-37  3.2 实验方法  37-38    3.2.1 嗜热四膜虫细胞的培养、饥饿和交配  37    3.2.2 TCD3和TCD4基因的5'和3'-RACE  37-38    3.2.3 TCD3和TCD4基因5'和3'-UTR顺式作用元件分布模式分析  38    3.2.4 DNA序列分析及Chromodomain的聚类分析  38  3.3 结果  38-40    3.3.1 TCD3和TCD4基因5'-UTR和3'-UTR的分析  38-39    3.3.2 TCD3和TCD4的分析  39-40    3.3.3 Chromodomain蛋白的聚类分析  40  3.4 讨论  40-43  参考文献  43-44第四章 四膜虫Tcd3和Tcd4的过表达定位分析  44-57  4.1 材料  44-47    4.1.1 菌株和质粒  44    4.1.2 主要实验设备及小型器具  44-45    4.1.3 引物设计  45    4.1.4 主要的酶及生化试剂  45    4.1.5 主要试剂的配制  45-47  4.2 方法  47-53    4.2.1 四膜虫基因组的快速提取  47    4.2.2 四膜虫TCD3和TCD4基因的克隆  47    4.2.3 OE-PBX-TCD3和OE-PBX-TCD4的构建  47-50    4.2.4 高压气体基因枪技术操作流程  50-51    4.2.5 Tcd3和Tcd4的免疫荧光定位  51-53  4.3 结果  53    4.3.1 OE-PBX-TCD3和OE-PBX-TCD4的鉴定  53    4.3.2 HA-Tcd3和HA-Tcd4的定位  53  4.4 讨论  53-55  参考文献  55-57总结与展望  57-59攻读学位期间取得的研究成果  59-60致谢  60-61个人简况及联系方式  61-63

相似论文

  1. 棉花纤维初始发育期14-3-3相互作用蛋白的酵母双杂交筛选,S562
  2. 碱蓬DREB同源基因的克隆与功能分析,Q943.2
  3. 泥鳅Dmrt1基因的克隆、表达和选择性剪接分析,Q78
  4. 基于Fosmid文库和PCR筛选技术的蜘蛛包卵丝蛋白基因克隆及分析,Q78
  5. 黄龙病菌侵染过程中柑橘防御相关基因的克隆及表达分析,S436.66
  6. 高羊茅中AtNYE1、AtNAP同源基因的分离及功能分析,Q943.2
  7. 天然棕色棉纤维葡萄糖苷转移酶基因Gh3GT的克隆与功能研究,S562
  8. 油茶ACCase基因BC和β-CT亚基的全长cDNA克隆,S794.4
  9. 油茶蛋白磷酸酶基因的全长cDNA克隆与序列分析,S794.4
  10. 用嗜热四膜虫为模型研究纳米材料的生物环境安全效应,TB383.1
  11. 东方山羊豆盐胁迫下抑制差减杂交文库的构建和分析及Ca~（2+）/H~+反向转运体基因的克隆,S541.9
  12. 烟草受PVY诱导相关基因的筛选、克隆与分析,S562
  13. 不同儿茶素含量茶树愈伤组织差异表达基因的cDNA—AFLP分析,S571.1
  14. 茶树种子在低温贮藏过程中差异基因表达的研究,S571.1
  15. 羟基红花黄色素A动态积累规律研究及相关基因的克隆,S567.219
  16. 籽鹅卵巢组织中产蛋相关基因的定量、克隆及序列分析,S835
  17. 棉花细胞质雄性不育相关基因分离及标记转化,S562
  18. 东方山羊豆4香豆酸：辅酶A连接酶（4CL）基因的克隆与表达研究,S541.9
  19. 陆地棉耐盐相关基因GhVP与GhSAMS的克隆、分析与表达,S562
  20. HCMV UL148基因全长cDNA的获得及生物信息学分析,R346

中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 分子遗传学
© 2012 www.xueweilunwen.com