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抗人MMP-2单克隆抗体的制备及应用组织芯片技术研究卵巢癌中MMP-2和P185蛋白的表达和临床意义

作　者: 游牧
导　师: 宋礼华；徐振山
学　校: 安徽医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 卵巢癌人工抗原单克隆抗体基质金属蛋白酶-2 P185蛋白组织芯片裸鼠
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:制备抗基质金属蛋白酶-2(MMP-2)单克隆抗体和多克隆抗体,对其生物学特性进行鉴定。并检测卵巢癌组织中MMP-2和P185蛋白的表达水平,探讨二者在卵巢癌发生发展中的作用、相互关系及其与卵巢癌临床病理特征之间的关系。为卵巢癌的发病、侵袭转移机制的研究及临床非手术靶向治疗提供理论依据。方法:MMP-2是小分子化合物,需要与大分子载体偶联后才具有免疫原性。本研究采用戊二醛法,将MMP-2分别与载体蛋白牛血清蛋白(Bovine serumalbumin,BSA)合成免疫抗原,与载体钥孔嘁血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin ,KLH)合成包被抗原,再经间接ELISA与SDS-PAGE电泳实验证明半抗原与载体蛋白是否偶联成功。以人工抗原MMP-2-BSA免疫Balb/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗MMP-2蛋白的单克隆抗体并予以纯化。通过间接ELISA方法测定单克隆抗体的效价,并用Western blot鉴定单克隆抗体的特异性。同时,以人工抗原MMP-2-BSA蛋白为抗原免疫家兔,制备抗MMP-2蛋白的抗血清并予以纯化,制备相应的多克隆抗体,用间接ELISA法测定多克隆抗体的效价。成功建立人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型后,应用免疫组织化学EnVision法检测MMP-2和P185在裸鼠移植瘤中的表达情况。同时,收集安徽医科大学附属医院1999年1月至2008年12月期间经手术切除的80例卵巢癌组织作为实验组,30例卵巢正常组织作为对照组。应用组织芯片和免疫组织化学EnVision法检测MMP-2和P185蛋白表达情况及其与卵巢癌临床病理特征的关系。结果:1、获得了人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH蛋白;筛选出了能够稳定分泌抗MMP-2单克隆抗体的杂交瘤细胞3G10,其单克隆抗体的亚型经鉴定为IgG1,抗体的效价在10~6以上。2、MMP-2和P185在裸鼠移植瘤中均呈强阳性表达。MMP-2在卵巢癌组织中的阳性表达率为73.75%(59/80),在正常组织中的阳性表达率为13.3%(4/30),差异具有显著性(P<0.01)。MMP-2的表达在组织学类型之间无显著性差异(P>0.05),而与卵巢癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05～P<0.01)。P185在卵巢癌组织中的阳性表达率为77.5%(62/80),在正常组织中的阳性表达率为20%(6/30),差异具有显著性(P<0.01),P185的表达在组织学类型之间无显著性差异(P>0.05),而与卵巢癌的分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05～P<0.01)。在卵巢癌组织中MMP-2和P185蛋白的表达呈显著正相关,相关系数r=0.38(P<0.01)。结论:1、合成了人工抗原MMP-2-BSA和MMP-2-KLH,并制备了抗人MMP-2的单克隆抗体。2、MMP-2和P185蛋白在人卵巢癌中表达水平明显增高,均与卵巢癌的组织病理分级、临床分期以及淋巴结转移均有关,提示MMP-2和P185蛋白高表达在卵巢癌的发生、分化、进展过程中起重要的作用,可以作为判定卵巢癌生物学行为和预后的指标,对指导卵巢癌的分子靶向治疗具有重要意义。3、MMP-2和P185蛋白在卵巢癌中表达呈正相关,二者共同作用可能在卵巢癌的发生发展过程中起协同作用。

全文目录

英文缩略词表  5-6
摘要  6-8
Abstract  8-11
第一部分  11-44
  1 前言  11-13
  2 材料与方法  13-32
  3 结果  32-39
  4 讨论  39-43
  5 结论  43-44
第二部分  44-67
  1 前言  44-46
  2 材料与方法  46-52
  3 结果  52-57
  4 讨论  57-66
  5 结论  66-67
参考文献  67-76
致谢  76-77
附录  77-79
综述  79-87
  参考文献  85-87

抗人MMP-2单克隆抗体的制备及应用组织芯片技术研究卵巢癌中MMP-2和P185蛋白的表达和临床意义

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