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耐受苯酚的细菌新种—Comamonas zonglianii BF-3~T的分离及其多相分类研究

作　者: 俞欣妍
导　师: 何健
学　校: 南京农业大学
专　业: 微生物学
关键词: 苯酚耐受菌 新种 多相分类研究 丛毛单胞菌属
分类号: X172
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


苯酚(Phenol)是一种芳香族类化合物,在医药、农药、染料和炼油等工业中普遍使用。但近年来研究发现,苯酚由于其毒性及难降解性,对环境造成了严重的污染,危害了人类的健康。苯酚已被美国环保署列入优先控制污染物和65种有毒污染物名单,同时它也是我国优先控制污染物之一。本丈从长期受到苯酚污染的土壤中分离得到一株耐受苯酚菌株,命名为BF-3T,其对苯酚的最高耐受浓度为1000mg·L-1。经形态观察、生理生化鉴定和16S rRNA序列分析,将其鉴定为丛毛单胞菌属(Comamonas sp.)。但BF-3T的系统发育分析同时表明,BF-3T与丛毛单胞菌属模式菌株构建的进化树上形成了一个独立的分枝,它与最近的模式菌株Comamonas aquatica LMG 2370T的同源性仅为96.8%,低于了新种的阈值97%,这些分析都明显指出了BF-3T是一新种的可能性。于是,我们利用多相分类技术对该菌及同源性最近的3个菌株(C. aquatica LMG 2370T、C. nitrativoransDSM 13191T和C. odontotermitis LMG 23579T)进行了分类学地位的研究。经研究可知,菌株BF-3T菌体呈短杆状(0.6-0.8×0.9-1.5μm),革兰氏染色阴性,无鞭毛。在30℃培养2d后,菌落呈浅黄色,圆形,半透明,中间突起,边缘平整。BF-3T好氧生长且最适生长条件为25-35℃,0-1% NaCl,pH 7-8。BF-3T接触酶、氧化酶、精氨酸双水解酶、脲酶、明胶水解呈阳性,可以利用吐温40、吐温80、葡萄糖酸盐、癸酸盐、己二酸盐及柠檬酸盐等碳源。BF-3T对氨苄青霉素、庆大霉素、青霉素G、利福平及链霉素均有抗性。BF-3T脂肪酸含量的主要成分为16：0、18：1/18：1ω7c、17:0 cyclo及summed feature 3 (16:1ω7c and/or 15:0 iso 2-OH),其中17:0 cyclo含量高于其他模式菌株。BF-3TDNA G+C mol%含量为65.2±1%。其与同源性最近的3个菌株的DNA-DNA杂交率为25.4%-28.7%,小于了新种认定的阈值(70%以下)。生理生化实验、系统发育分析、脂肪酸含量及DNA-DNA杂交等实验,表明了菌株BF-3T (=CCTCC AB 209170T=DSM 22523T)为丛毛单胞菌属的一个新种的模式菌株,命名为Comamonas zonglianii sp. nov.。

全文目录


摘要  7-8ABSTRACT  8-10符号与缩略语说明  10-11前言  11-12文献综述  12-34  一 苯酚的污染现状及其研究进展  12-23    1 苯酚的概述  12-16      1.1 苯酚的性状及应用  12      1.2 苯酚的污染现状  12-14      1.3 苯酚污染的危害  14-15      1.4 苯酚污染的控制  15-16    2 环境中苯酚的去除研究  16-17      2.1 物理方法  16      2.2 化学方法  16      2.3 生物方法  16-17    3 微生物降解苯酚的研究进展  17-20      3.1 高效苯酚降解菌的国内外研究现状  17-18      3.2 苯酚降解菌的代谢途径研究  18-20    4 微生物对苯酚耐受性的研究进展  20-23      4.1 苯酚等有机溶剂对微生物的毒性作用机制  20-22      4.2 微生物对苯酚等有机溶剂的耐受机制  22-23  二 微生物分类方法研究概述  23-28    1 传统分类方法  23-24    2 化学分类方法  24-25    3 遗传特征分类法  25-27      3.1 RNA同源性分析  26      3.2 细菌G+Cmol%的测定  26      3.3 DNA-DNA杂交  26-27      3.4 脉冲电泳核型分析(PFGE)  27    4 微生物分类鉴定方法的前景展望  27-28  参考文献  28-34实验部分  34-62  第一章 苯酚耐受菌株BF-3T的分离筛选与生长特性研究  34-44    1 材料与方法  34-37      1.1 供试土样、菌株、培养基及试剂  34-35      1.2 耐受菌株的分离、筛选  35      1.3 耐受菌株的16S rRNA基因序列的测定  35-37      1.4 耐受菌株系统发育树地位的确定与系统发育关系的研究  37      1.5 耐受菌株的培养特征及生理生化鉴定  37      1.6 菌体的培养与生长量的测定  37    2 结果与分析  37-43      2.1 环境样品中苯酚耐受菌株的分离、筛选  37      2.2 BF-3T的菌落和个体形态  37-38      2.3 BF-3T的16S rRNA的扩增及序列分析  38-40      2.4 BF-3T的生理生化特征  40-41      2.5 环境条件对菌株BF-3T生长的影响  41-43    3 讨论  43    参考文献  43-44  第二章 苯酚耐受菌株BF-3T的分类地位研究  44-62    1 材料与方法  44-49      1.1 供试菌株、培养基及试剂  44-45      1.2 菌株表型特征分析  45      1.3 菌株化学分类特征分析——细胞脂肪酸分析  45-46      1.4 菌株基因型特性分析  46-49    2 结果与分析  49-58      2.1 菌株表型特征分析  49-53      2.2 菌株化学分类特征分析——细胞脂肪酸分析  53-54      2.3 菌株基因型特性分析  54-57      2.4 新种的命名与发表  57-58    3 讨论  58-59    参考文献  59-62全文总结  62-64本文的主要创新点  64-66附录一 文中所用培养基及试剂配方  66-68附录二 研究中获得的相关DNA序列  68-69附录三 攻读硕士学位期间发表或已录用的论文  69-70致谢  70

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中图分类: > 环境科学、安全科学 > 环境科学基础理论 > 环境生物学 > 环境微生物学
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