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Apoptin相互作用蛋白FAM96B在肿瘤中的表达及功能的研究

作　者: 朱瑜超
导　师: 田俊
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: FAM96B Apoptin/ VP3 相互作用蛋白质凋亡肿瘤荧光实时定量RT-PCR
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

Apoptin/ VP3(凋亡素)是来源于鸡贫血病毒的一种小分子蛋白,通过线粒体途径特异性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞无毒副作用,但其作用机制尚未完全阐明。目前,相继发现了多种与Apoptin相互作用的蛋白质,如:death effector domain associated factor (DEDAF) ,anaphase promoting complex/cyclosome subunit 1 (APC/C) , N-myc interacting protein (NMI) ,Acid ceramidase , SUMO , promyelocytic leukemia protein (PML) , Ppil3,CRM1, imprtin-β1等,据文献报道,这些蛋白质均与Apoptin特异性诱导肿瘤细胞凋亡密切相关。2009年,Maddika等报道,CDK2是磷酸化修饰Apoptin 108T的激活酶,Apoptin与PI3K的p85亚基相互作用别构激活PI3K,PI3K活化后使Akt激活,Akt与Apoptin共定位于核内,进一步激活CDK2,CDK2活化后磷酸化修饰Apoptin。因此,分析研究这些与Apoptin相互作用的蛋白质,对阐明Apoptin的诱导肿瘤特异性凋亡机制具有重要意义。酵母双杂交系统是目前研究蛋白之间相互作用的主流方式之一。前期荷兰莱顿大学某课题组以Apoptin为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统钓取到Apoptin相互作用蛋白十种,AIP1、AIP2、AIP3、AIP4、AIP5、AIP6、AIP7、AIP8、AIP9与AIP10 ,其中AIP3即为FAM96B。FAM96B,96序列相似的家庭成员B,亦称为CGI-128[17-20],位于染色质16q22.1-q22.3,据推测分子量大概在20kD,其功能尚未阐明。2010年Shinsuke Ito.等报道FAM96B与有丝分裂染色体分离和不规则形状细胞核的堆积密切相关,可能导致XP-D(着色性干皮病)和XP-D/CS等家族遗传疾病较高的发病率[21]。另外,荷兰莱顿大学这个课题组已经通过免疫共沉淀方法从胞内证实了FAM96B与Apoptin相互作用。他们进一步研究发现:在肿瘤细胞中FAM96B分布于细胞质,过表达FAM96B通过与Apoptin的相互作用可致部分Apoptin滞留于细胞质中;过表达FAM96B的显著降低Apoptin诱导HepG2细胞凋亡率,从而抑制Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡的效应;FAM96B在乳腺癌组织中mRNA的表达水平显著低于正常组织。FAM96B有可能是一种新的抑癌基因。本研究通过荧光实时定量RT-PCR方法检测FAM96B在肿瘤细胞以及肿瘤组织中mRNA的表达水平,发现FAM96B在HepG2细胞中mRNA的表达水平显著低于L02细胞;FAM96B在肺癌组织中mRNA的表达水平显著低于正常组织;FAM96B在肝癌组织中mRNA的表达水平显著低于正常组织。进一步研究, HepG2细胞内过表达FAM96B,分别用AnnexinV-FITC/PI双染法检测HepG2细胞凋亡率及MTT法检测HepG2细胞存活率,结果发现:过表达FAM96B促进HepG2细胞凋亡;过表达FAM96B抑制HepG2细胞增殖。以上结果均显示FAM96B有可能是一种新的抑癌基因。到目前为止,关于Apoptin特异性诱导肿瘤细胞凋亡的机制尚不十分清楚。对FAM96B的深入研究不仅能够进一步了解Apoptin的作用机制,也可能为肿瘤发生、发展的分子机制提供新的线索。

全文目录

一、中文摘要  5-7
二、英文摘要  7-10
三、论文正文  10-35
  引言  11-14
  材料与方法  14-24
  实验结果  24-29
  讨论  29-31
  小结  31-32
  参考文献  32-35
四、综述  35-52
  综述参考文献  48-52
五、致谢  52

Apoptin相互作用蛋白FAM96B在肿瘤中的表达及功能的研究

内容摘要

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