学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

转大豆WRKY基因烟草后代的鉴定及生理特性研究

作　者: 刘林娟
导　师: 王晓萍
学　校: 哈尔滨师范大学
专　业: 遗传学
关键词: 烟草 WRKY HY1 HY5 生理指标
分类号: S572
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 53次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

WRKY家族是近年来发现的一类植物特有的转录因子,广泛参与植物对生物与非生物胁迫应答反应,在生物胁迫、防卫反应信号分子、干旱、低温、创伤和重金属等不同的环境胁迫条件下能被诱导表达,参与植物新陈代谢、果实成熟、种皮和毛状体发育以及衰老等一系列生理活动。本研究以分别转入大豆WRKY基因家族中的HY1和HY5基因的烟草T1代种子为试验材料,对转基因烟草子代进行抗生素筛选、PCR和RT-PCR检测,研究外源基因在子代间遗传的稳定性,并对盐胁迫下的转基因烟草T2代进行生理指标的检测,为HY1和HY5基因的功能研究提供参考,为今后利用大豆WRKY基因培育其它抗逆植物奠定基础,对植物抗逆机理的研究也具有一定的理论意义。主要研究结果如下:将转HY1基因和转HY5基因的烟草T1种子经过无菌处理后,接种于不含激素的固体MS培养基(附加3%蔗糖、0.7%琼脂,pH 5.8)中,获得T1代转基因烟草幼苗,出芽率分别为56.6%和56.4%。一周后转入MS+50mg/L Kan培养基中筛选抗性植株。采用CTAB法提取转HY1基因和转HY5基因T1代和T2代植株总DNA,设置未转化植株为阴性对照,经PCR检测,转HY1基因烟草植株获得600bp目的条带,转HY5基因烟草植株获得530bp目的条带,与预期相符。用异硫氰酸胍法提取T2代转化植株叶片总RNA,以HY1和HY5基因特异引物分别对T2代植株总RNA进行RT-PCR扩增,设置未转化植株为阴性对照,结果转HY1基因烟草植株获得600bp目的条带,转HY5基因烟草植株获得约530bp目的条带,与预期相符。经不同浓度NaCl处理后,对转基因烟草T2代植株POD、SOD活性和可溶性蛋白含量进行了检测。POD、SOD活性均随胁迫浓度增加,呈现先升高后降低的趋势。两种转基因烟草的POD活性在100mmol/L达到最大。转HY1基因烟草T2代植株SOD活性和可溶性蛋白含量在50mmol/L NaCl浓度时达到最大值,转HY5基因烟草T2代植株的SOD活性在150mmol/L时达到最大值,可溶性蛋白含量在100mmol/L时达到最大值。以上三个指标均比未转基因对照植株提高,表明转HY1基因和HY5基因的烟草抗盐胁迫能力有所提高。

全文目录

摘要  8-9
ABSTRACT  9-11
第1章绪论  11-22
  1.1 植物WRKY 基因及WRKY 转录因子研究进展  11-14
    1.1.1 WRKY 转录因子  11-12
    1.1.2 WRKY 转录因子生物学功能  12-13
      1.1.2.1 WRKY 基因调控植物生长发育  12
      1.1.2.2 WRKY 基因调控植物抗病反应  12-13
    1.1.3 大豆WRKY 转录因子研究进展  13-14
  1.2 烟草转基因研究进展  14
  1.3 植物基因转化研究概况  14-21
    1.3.1 植物基因转化的研究进展  14-15
    1.3.2 植物基因转化的受体系统和方法  15-18
      1.3.2.1 植物基因转化的受体研究  15-16
      1.3.2.2 植物基因转化的方法概述  16-18
    1.3.3 转基因植物的检测及鉴定  18-21
      1.3.3.1 整合水平检测  18-19
      1.3.3.2 转录水平检测  19-20
      1.3.3.3 翻译水平检测  20
      1.3.3.4 原位杂交检测  20-21
  1.4 研究的目的和意义、技术路线  21-22
    1.4.1 目的和意义  21
    1.4.2 技术路线  21-22
第2章材料与方法  22-32
  2.1 试验材料  22-25
    2.1.1 植物材料  22
    2.1.2 主要工具酶和试剂盒  22
    2.1.3 引物合成  22
    2.1.4 化学试剂  22
    2.1.5 主要仪器和设备  22-23
    2.1.6 常用溶液和培养基  23-25
  2.2 试验方法  25-32
    2.2.1 筛选T1 代转基因烟草抗性苗  25
    2.2.2 T1 代转基因烟草抗性苗炼苗和移栽  25
    2.2.3 筛选T2 代转基因烟草抗性苗  25-26
    2.2.4 PCR 检测转化植株  26-27
      2.2.4.1 转化植株总DNA 提取  26-27
      2.2.4.2 PCR 检测  27
    2.2.5 RT-PCR 检测转化植株  27-29
      2.2.5.1 转化植株总RNA 提取  27-28
      2.2.5.2 RT-PCR 检测  28-29
    2.2.6 转基因烟草T2 代生理指标检测  29-32
      2.2.6.1 植物材料处理  29-30
      2.2.6.2 过氧化物酶（POD）活性测定  30
      2.2.6.3 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定  30-31
      2.2.6.4 可溶性蛋白含量测定  31-32
第3章结果与分析  32-39
  3.1 转基因烟草抗性苗  32
  3.2 PCR 检测转基因植株  32-35
    3.2.1 T1 代植株总DNA 提取及PCR 检测  32-33
    3.2.2 T2 代植株总DNA 提取及PCR 检测  33-35
  3.3 RT-PCR 检测转基因植株  35-36
    3.3.1 转基因烟草植株总RNA 提取  35
    3.3.2 RT-PCR 检测  35-36
  3.4 转化植株生理指标检测  36-39
    3.4.1 NaCl 不同处理浓度对T2 转基因烟草POD 活性影响  36-37
    3.4.2 NaCl 不同处理浓度对T2 转基因烟草SOD 活性影响  37-38
    3.4.3 NaCl 不同处理浓度对T2 转基因烟草可溶性蛋白含量的影响  38-39
第4章讨论  39-42
  4.1 卡那霉素筛选与PCR 检测  39
  4.2 RT -PCR  39-40
  4.3 转基因植株的生理指标检测  40-42
结论  42-44
参考文献  44-49
攻读硕士期间所发表的学术论文  49-50
致谢  50

转大豆WRKY基因烟草后代的鉴定及生理特性研究

内容摘要

全文目录

相似论文